特应性皮炎寒湿证病证结合小鼠模型的构建研究

作     者：吴汶丰 余彦栩 吴清 叶思褀 张瑜 刘俊峰 莫秀梅 陈达灿 晏烽根 WU Wenfeng;YU Yanxu;WU Qing;YE Siqi;ZHANG Yu;LIU Junfeng;MO Xiumei;CHEN Dacan;YAN Fenggen

作者机构：广州中医药大学第二临床医学院广州510405 广州中医药大学第二附属医院广州510120 粤港澳中医药与免疫疾病研究联合实验室广州510120 省部共建中医湿证国家重点实验室广州510120 

出 版 物：《中国中医基础医学杂志》 (JOURNAL OF BASIC CHINESE MEDICINE)

年 卷 期：2024年第30卷第9期

页      面：1500-1507页

学科分类：1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年项目(82004364) 广东省科技部共建中医湿证国家重点实验室项目(SZ2021ZZ17,SZ2021ZZ39) 广东省重点领域研发计划项目(2020B1111100010) 广东省科学技术厅中医药防治难治性慢病重点实验室项目(2018B030322012) 市校(院)企联合资助项目(2024A03J0544) 

主　　题：特应性皮炎 寒湿证 病证结合 Claudin-1 TRPV3 TRPV4 Th17/Treg细胞比值 

摘      要：目的构建特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)寒湿证病证结合小鼠模型,并对模型进行宏观表征及微观指标评价。方法将Balb/c小鼠随机分为正常对照组、疾病模型组、寒湿证组、病证结合组,每组6只。其中正常对照组小鼠外涂基质液;疾病模型组小鼠外涂二硝基氯苯(dinitrochlorobenzene,DNCB),模拟特应性皮炎疾病模型;寒湿证组小鼠在外涂基质液基础上,采用人工气候箱模拟寒湿环境[温度(4±2)℃、相对湿度(90±5)%],并结合高脂饲料喂养模拟寒湿证;病证结合组小鼠在DNCB造模基础上,结合寒湿证证候模拟方法进行复合造模。采用经皮水分流失测量仪对动物经皮水分流失(transepidermal water loss,TEWL)进行测量和评估;对小鼠皮炎和寒湿证证候情况进行观察评价;对搔抓行为进行记录分析;HE染色观察小鼠背部皮肤组织病理改变,并对其表皮厚度和炎症细胞浸润情况进行分析;Western blot法检测皮肤中紧密连接蛋白1(Claudin-1)、瞬时受体电位香草酸3(transient receptor potential vanilloid 3,TRPV3)和TRPV4蛋白的表达水平;利用流式细胞术分析淋巴结辅助性T细胞17(helper T cells 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比值。结果与疾病模型组比较,病证结合组小鼠的证候评分明显升高(P0.001),TEWL值明显升高、背部皮肤表皮厚度明显增加(P0.05),背部皮肤的Claudin-1、TRPV3蛋白表达量显著降低(P0.01),而TRPV4蛋白表达显著升高(P0.05)。结论采用DNCB进行特应性皮炎疾病造模,并结合寒湿环境及高脂饮食的寒湿证造模方式,能够成功构建特应性皮炎寒湿证病证结合小鼠模型。该研究为后续深入探索特应性皮炎寒湿证病证结合动物模型构建及中药复方对AD的药效学研究提供了较理想的动物模型。