基于蛋白组学探讨灵芝酸X治疗肝母细胞瘤的作用机制

作     者：叶婷 高航 葛洋 沈瑞 余鸿雁 陈峰远 宋航 YE Ting;GAO Hang;GE Yang;SHEN Rui;YU Hong-yan;CHEN Feng-yuan;SONG Hang

作者机构：安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 蚌埠医学院安徽省转化性肿瘤研究重点实验室安徽蚌埠233030 

出 版 物：《中国中药杂志》 (China Journal of Chinese Materia Medica)

年 卷 期：2024年第49卷第15期

页      面：4158-4166页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：安徽省自然科学基金项目(2108085Y29) 癌症转化医学安徽省重点实验室(蚌埠医学院)项目(KFZZ202205) 安徽省教育厅重点项目(2023AH050870) 

主　　题：灵芝酸X 肝母细胞瘤 蛋白组学 自噬 

摘      要：基于蛋白组学探讨灵芝酸X(ganoderic acid X,GAX)对人肝母细胞瘤HepG2、HuH6细胞模型和非肥胖型糖尿病/重症联合免疫缺陷(nonobese diabetic-severe combined immune deficient,NOD-SCID)小鼠皮下移植瘤模型的作用机制,为灵芝酸X的临床应用提供依据。采用CCK-8法检测灵芝酸X对HepG2、HuH6细胞活力的影响;EdU实验检测灵芝酸X对细胞增殖的影响;划痕实验检测灵芝酸X对细胞迁移能力的影响;Hoechst 33258染色检测灵芝酸X对细胞凋亡的影响;建立NOD-SCID小鼠皮下移植瘤模型,分析对照组及灵芝酸X低、中、高剂量组(5、10、20 mg·kg^(-1))肿瘤体积和质量;苏木素-伊红(HE)染色评估灵芝酸X的药物毒性。此外,收集HepG2细胞对照组和灵芝酸X高剂量组的细胞,分别进行laber-free蛋白组学分析,筛选差异蛋白并富集相关信号通路,CYTO-ID?染色检测细胞自噬情况,Western blot实验检测相关蛋白的表达量。体外结果显示,灵芝酸X呈剂量依赖性抑制HepG2、HuH6细胞的增殖、迁移、诱导凋亡;体内研究显示灵芝酸X显著抑制肿瘤体积和质量,且对小鼠主要脏器(心、肝、脾、肺、肾)无明显损害;laber-free蛋白组学结果显示灵芝酸X在肝母细胞瘤治疗过程中参与多种信号通路,其中自噬途径高度富集。CYTO-ID?染色及Western blot结果显示灵芝酸X诱导细胞自噬并上调苄氯素1(Beclin-1)、自噬相关基因5(ATG5)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白表达量,下调螯合体1(p62)蛋白表达量。该研究表明,灵芝酸X通过诱导自噬进而抑制肝母细胞瘤细胞的增殖、迁移和诱导凋亡,并显著抑制肿瘤生长,是一种有希望的癌症辅助治疗药物。