新西兰兔下丘脑qPCR内参基因的筛选和验证

作     者：姜幸慧 陈晶 张洺瑞 邱水玲 甘乾福 JIANG Xinghui;CHEN Jing;ZHANG Mingrui;QIU Shuiling;GAN Qianfu

作者机构：福建农林大学动物科学学院福建福州350002 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第56卷第9期

页      面：48-55页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：福建省中青年教师教育科研项目(JAT220070) 福建省科技计划项目[高校产学合作项目(2023N5004),星火项目(2023S0007,2023S0015,2023S0054),对外合作项目(2023I1009)] 福建农林大学农村振兴服务团队-草食性动物产业服务团队项目(11899170139) 

主　　题：新西兰白兔 下丘脑 内参基因 稳定性评价和验证 

摘      要：为筛选适合新西兰白兔下丘脑的最佳内参基因,试验选定甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、肌动蛋白β(ACTB)、β-2-微球蛋白(B2M)、酪氨酸3-单加氧酶(YWHAZ)、次黄嘌呤磷酸核糖转移酶1(HPRT1)、核糖体蛋白L4(RPL4)和TATA-box结合蛋白(TBP)共7个候选内参基因,利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术对不同年龄、性别及发情状态的新西兰白兔下丘脑组织的基因表达水平进行检测;通过RefFinder在线软件综合ΔCt、GeNorm、NormFinder和BestKeper等4种算法的分析结果来评估内参基因表达的稳定性,并选取在下丘脑表达的功能基因雌激素受体(ER1)、孕激素受体(PGR)和RFamide神经肽VF(NPVF)对候选内参基因稳定性和评价结果的可靠性进行验证。结果:不同年龄的雌性新西兰白兔下丘脑稳定表达的内参基因是YWHAZ和GAPDH;雄性新西兰白兔下丘脑稳定性表达的内参基因YWHAZ和TBP,而不同发情期新西兰白兔适合使用HPRT1和YWHAZ作为内参基因。当使用不同内参基因进行标准化时,目的基因表达水平受到样本不同生理状态而出现明显变化,强调了先行验证内参基因对于qPCR研究基因表达水平的重要性。