基因枪介导的转PYL5基因小麦的获得与鉴定

作     者：池青 周鹏 刘香利 程绘绘 赵惠贤 CHI Qing;ZHOU Peng;LIU Xiang-li;Cheng Hui-hui;ZHAO Hui-xian

作者机构：西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨凌712100 

出 版 物：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 (Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition))

年 卷 期：2015年第43卷第2期

页      面：72-78页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：转基因生物新品种培育科技重大专项(2011ZX08002-004) 国家自然科学基金项目(31101205) 国家自然科学基金项目(31471482) 西北农林科技大学基本科研业务专项(QN2011111) 

主　　题：小麦 基因枪法 共转化法 PYL5基因 

摘      要：【目的】通过基因枪介导共转化,获得转拟南芥抗旱基因PYL5的小麦植株,为转基因小麦的抗旱功能研究奠定基础。【方法】以小麦品种西农889、绵阳19和宁春16为供试材料,通过基因枪介导法将诱导型启动子Rd29A启动的PYL5基因和筛选标记基因Bar共转化到小麦幼胚愈伤组织中,经过除草剂PPT(Phosphinothricin)筛选和愈伤组织分化,获得再生植株。根据目标基因PYL5和Bar基因序列分别设计特异引物,对移栽成活的小麦T0代再生植株进行基因特异性PCR检测。【结果】采用基因枪分别轰击西农889的1800个、绵阳19的800个和宁春16的800个幼胚愈伤组织,经过筛选和分化分别获得了9,5和14株小麦再生植株;对转基因小麦T0代再生植株的基因特异性PCR检测结果表明,西农889、绵阳19和宁春16 Bar基因的转化率分别为0.280%,0.500%和0.750%,PYL5基因的转化率分别为0.110%,0.125%和0.500%,Bar和PYL5基因的共转化率分别为0.110%,0.125%和0.500%。【结论】PYL5基因成功转入到了小麦品种西农889、绵阳19和宁春16中。