棉花黄萎病菌gDNA提取方法和不同单孢的RAPD分析

作     者：刘学堂 郭金城 张元恩 宋晓轩 孙君灵 李为 

作者机构：中国农业科学院棉花研究所农业部棉花遗传改良重点实验室河南安阳455112 中国农业大学植物科技学院植病系北京100094 河南农业大学河南郑州450002 

出 版 物：《河南农业大学学报》 (Journal of Henan Agricultural University)

年 卷 期：1999年第33卷第3期

页      面：274-278页

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

主　　题：棉花黄萎病菌 DNA提取 单孢 RAPD分析 

摘      要：选用棉花黄萎病菌代表性的菌系 Ｖａ（ Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ａｌｂｏａｔｒｕｍ 的一个菌株） 和 Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ 的落叶型菌系 Ｖ Ｄ－８ ， Ｔ９ 及非落叶型菌系 Ｊｙ（ 致病力较强的泾阳菌系） ，以 Ｋｅ（ 致病力较弱的库尔勒菌系） 作为实验对象，研究了 Ｃ Ｔ Ａ Ｂ 和氯化苄２ 种提取方法的优劣．结果表明： Ｃ Ｔ Ａ Ｂ 法比氯化苄法提取的 Ｄ Ｎ Ａ 片段长（５０ｋｂ） ，纯度高（ Ｏ Ｄ２６０／ Ｏ Ｄ２８０ ＝ １５６） ，且稳定、无污染，适合于常规分子生物学研究；该提取方法中 Ｅ Ｄ Ｔ Ａ， Ｎａ Ｃｌ 和β巯基乙醇的最佳配比为１０ ｍ ｍｏｌ，１４ ｍｏｌ 和２ ％ ．利用提取的５ 个菌系的ｇ Ｄ Ｎ Ａ 对 Ｏ Ｐ Ｙ 及 Ｏ Ｐ Ｂ 两组引物进行了筛选，１６ 个引物可以扩增出多态性的谱带．利用引物对 Ｖａ 菌系的４ 个单孢进行的 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ 分析，从分子水平证明了不同单孢之间发生变异的可能性．