蠲瘤散结方对人肺腺癌A549细胞增殖和糖酵解的调控作用及机制研究

作     者：刘艳霞 吴建春 骆莹滨 李雁 LIU Yanxia;WU Jianchun;LUO Yingbin;LI Yan

作者机构：上海中医药大学附属市中医医院肿瘤科上海200071 

出 版 物：《辽宁中医杂志》 (Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2024年第51卷第8期

页      面：18-23,I0001,I0002页

学科分类：100506[医学-中医内科学] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81973795,82174183) 上海申康医院发展中心临床三年行动计划项目(SHDC2020CR4052) 

主　　题：蠲瘤散结方 肺腺癌 增殖 糖酵解 AKT 

摘      要：目的研究蠲瘤散结方对肺腺癌A549细胞增殖和糖酵解得影响,并探讨其潜在的分子机制。方法CCK-8法(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度蠲瘤散结方(2、4、6、8、10、12 mg·mL^(-1))处理A549细胞24 h和48 h后的细胞活力。将A549细胞分为对照组和蠲瘤散结方低、高(3、6 mg·mL^(-1))浓度组,加药干预24 h,细胞克隆形成实验检测A549细胞增殖情况;流式细胞术检测A549细胞周期;试剂盒检测细胞上清液中葡萄糖消耗量、乳酸生成水平;测量仪检测细胞上清液酸碱度(potential of hydrogen,pH值);实时荧光定量逆转录PCR(real-time RT-PCR,RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(western blot,WB)检测蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(phosphorylation protein kinase B,p-AKT)、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、葡萄糖转运体1(facilitative glucose transporter,Glut1)、己糖激酶2(hexokinase2,HK2)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)、乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)基因和蛋白的表达。使用AKT激活剂后,试剂盒检测细胞上清液液中葡萄糖消耗量、乳酸生成水平;pH测量仪检测细胞上清液pH值;CCK-8检测A549细胞增殖,RT-qPCR和Western blot检测AKT(p-AKT)、Hif-1α、Glut1、HK2、PKM2、LDHA基因和蛋白的表达。结果蠲瘤散结方抑制A549细胞增殖(P0.05),与对照组比较,蠲瘤散结方低、高(3、6 mg·mL^(-1))浓度组细胞克隆形成率降低(P0.05,P0.01),G0/G1期细胞比率下降(P0.05,P0.01),细胞上清液中葡萄糖消耗量以及乳酸生成量下降(P0.05,P0.01),AKT(p-AKT)、Hif-1α、Glut1、HK2、PKM2、LDHA基因和蛋白的表达下降(P0.05,P0.01)。使用AKT激活剂后,与蠲瘤散结方高浓度组比较,蠲瘤散结方联合AKT激活剂用药组细胞上清液葡萄糖消耗量和乳酸生成量上升(P0.05,P0.01),pH值下降(P0.05),细胞增殖活力上升(P0.05),AKT(p-AKT)、Hif-1α、Glut1、HK2、PKM2、LDHA基因和蛋白的表达上升(P0.05)。结论蠲瘤散结方对A549细胞的增殖和糖酵解具有抑制作用,其机制可能与调控AKT信号通路有关。