葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻小鼠肠道机械屏障的影响

作     者：伍冲梅 潘坤 谢果珍 郑淘 惠华英 WU Chongmei;PAN Kun;XIE Guozhen;ZHENG Tao;HUI Huaying

作者机构：湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湖南中医药大学医学院湖南长沙410208 

出 版 物：《湖南中医药大学学报》 (Journal of Hunan University of Chinese Medicine)

年 卷 期：2024年第44卷第8期

页      面：1351-1359页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81703985) 湖南省卫生健康委员会科研计划项目(D202303038538) 

主　　题：泄泻 肠道湿热证 葛根芩连汤 机械屏障 肠道形态 紧密连接蛋白 

摘      要：目的探讨葛根芩连汤对肠道湿热证泄泻模型小鼠肠道机械屏障的作用机制。方法选取15只SPF级雄性昆明小鼠,随机分为正常组5只和模型组10只。采取“高糖高脂+高温高湿+白酒稀释液+冰水法复制肠道湿热证泄泻小鼠模型,造模成功的10只小鼠随机分为自愈组和治疗组,每组5只。治疗组灌胃5.07 g/(kg·d)葛根芩连汤水煎液,正常组和自愈组给予等容积无菌水,连续灌胃4 d后无菌提取各组小鼠十二指肠、空肠和回肠肠段。观察各组小鼠一般状态;HE染色观察各组肠段形态;采用Image J图像处理软件测量各组绒毛长度(villus height,VH)、隐窝深度(crypt depth,CD),计算VH与CD的比值(绒隐比,V/C)、杯状细胞数目和紧密连接蛋白平均光密度值(average optical density value,AOD);采用二步法免疫组织化学法分析各肠段密封蛋白1(Claudin 1)、闭合蛋白(Occludin)和紧密连接蛋白-1(zonula occluden-1,ZO-1)的表达。结果正常组小鼠毛发有光泽,精神状态佳,饮水量、肛温和二便均正常;治疗组小鼠毛发洁白、精神状态良好、大便颗粒饱满、肛温恢复正常、泄泻症状消失;自愈组小鼠毛发暗淡、肛温高、大便含水量较多、挤压不成型。与正常组相比,自愈组十二指肠、空肠和回肠肠黏膜结构部分受损,小肠腺出现萎缩,出现炎性症状。与自愈组相比,治疗组肠黏膜结构较清晰,肠上皮细胞和固有层细胞排列紧密,炎症情况明显改善。与正常组相比,自愈组十二指肠CD升高(P0.01),十二指肠V/C和杯状细胞数降低(P0.05,P0.01);治疗组十二指肠V/C降低(P0.05)。与正常组相比,自愈组空肠、回肠VH和V/C均明显降低(P0.05,P0.01)。与自愈组相比,治疗组十二指肠CD显著降低(P0.01),十二指肠、回肠V/C升高(P0.05,P0.01)。十二指肠肠段,与正常组相比,自愈组和治疗组Claudin 1、Occludin、ZO-1 AOD值降低(P0.05,P0.01);与自愈组相比,治疗组Claudin 1、Occludin、ZO-1 AOD值显著升高(P0.01)。与正常组比较,自愈组空肠、回肠肠段Occludin AOD值明显降低(P0.01)。与自愈组比较,治疗组空肠肠段Claudin 1 AOD值升高(P0.05),回肠肠段Occludin AOD值明显升高(P0.01)。结论葛根芩连汤可改善肠道湿热证泄泻小鼠肠道炎症水平、促进紧密连接蛋白Claudin1、Occludin和ZO-1的表达,其机制可能与修复肠道机械屏障功能有关。