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葛根芩连汤对KKAy糖尿病小鼠TLR4/IKKβ/NF-κB信号通路的影响

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中国实验方剂学杂志 2022年第6期28卷 1-6页

作者：王芬张丽萍王锐何华亮刘铜华北京中医药大学第三附属医院北京100029 武警北京总队医院北京100027 北京中医药大学教育部中医养生学重点实验室北京100029

目的:观察经方葛根芩连汤对KKAy小鼠部分炎性因子及脂多糖介导的炎症通路中关键靶点的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法:选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠65只及对照C57BL/6J小鼠13只予屏障系统、高脂饲料喂养,随机... 详细信息

目的:观察经方葛根芩连汤对KKAy小鼠部分炎性因子及脂多糖介导的炎症通路中关键靶点的影响,探讨其改善2型糖尿病的作用机制。方法:选取SPF级自发性2型糖尿病动物模型KKAy小鼠65只及对照C57BL/6J小鼠13只予屏障系统、高脂饲料喂养,随机血糖≥13.9 mmoL·L^(-1),为成模小鼠44只。随机分为5组,每组11只。正常组(生理盐水20 mL·kg^(-1))、阿卡波糖组(3.9 mg·kg^(-1))、葛根芩连汤高、低剂量组(1.82、0.45 g·kg^(-1))及模型组(生理盐水20 mL·kg^(-1)),连续灌胃给药8周,1次/d,系统评价血糖及体质量。末次给药12 h后,摘眼球取血,提取血清及肌肉、肝脏组织。采用半定量酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及葡萄糖转运子4(GluT4)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肌肉组织IκB磷酸化激酶β(IKKβ)蛋白、核转录因子-κB(NF-κB)及肝组织Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组体质量及血糖显著升高(P葛根芩连汤组能够明显降低体质量及血糖水平(P葛根芩连汤高剂量组GluT4含量明显升高(P葛根芩连汤组IKKβ、NF-κB及TLR4蛋白表达均明显下降(P葛根芩连汤可能在调节肠道菌群的基础上,通过下调TLR4通路中关键炎性因子的水平,抑制其激活,提高GluT4的转位及活性水平,从而在一定程度上抑制炎性级联效应,改善2型糖尿病。

关键词：葛根芩连汤糖尿病 Toll样受体4(TLR4)/IκB磷酸化激酶β(IKKβ)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路 KKAy小鼠

葛根芩连汤中各成分在正常与大肠湿热证模型大鼠的肠吸收差异研究

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中国中药杂志 2020年第1期45卷 169-178页

作者：陈阳崔波范燕豪李小琪安叡陆杰上海中医药大学上海201203

为比较正常大鼠与大肠湿热证模型大鼠对葛根芩连汤中指标成分的肠吸收差异,并从吸收环节探讨该复方临床治疗大肠湿热证的合理性,该研究将低、中、高3个浓度的葛根芩连汤分别在正常大鼠和大肠湿热证模型大鼠进行离体外翻肠囊法肠试验,采... 详细信息

为比较正常大鼠与大肠湿热证模型大鼠对葛根芩连汤中指标成分的肠吸收差异,并从吸收环节探讨该复方临床治疗大肠湿热证的合理性,该研究将低、中、高3个浓度的葛根芩连汤分别在正常大鼠和大肠湿热证模型大鼠进行离体外翻肠囊法肠试验,采用HPLC检测肠外翻样品中10个指标成分的含量,计算各成分在各肠段的累积吸收量(Q/μg)和吸收速率(Ka),并进行对比。结果发现正常鼠和模型鼠对同质量浓度的葛根芩连汤吸收程度不同。大肠湿热证模型大鼠使葛根芩连汤中的多数成分在不同肠段的肠吸收均有一定程度增加。其中200 g·L-1质量浓度葛根芩连汤中各组分的累积吸收量均在模型鼠空肠最高,除大豆苷和黄芩苷外均在回肠、十二指肠、结肠中吸收依次降低;比较吸收速率常数,各组分在十二指肠与空肠吸收均显著增加(P葛根素、大豆苷、甘草苷、黄连碱及小檗碱在结肠的吸收选择性增加。因此提示在进行吸收效应相关的成分研究时,宜采用病理模型动物,可真正为葛根芩连汤对症治疗大肠湿热证奠定研究基础。

关键词：葛根芩连汤肠外翻肠吸收大肠湿热证

葛根芩连汤三氯甲烷提取物缓解伊立替康所致肠毒性的作用机制分析

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中国实验方剂学杂志 2021年第16期27卷 16-23页

作者：吴亿晗成颜芬王迪杨晓琴钟雪梅林洁傅超美章津铭胡一晨成都中医药大学药学院成都611137 成都大学食品与生物工程学院成都610106

目的:基于经典名方葛根芩连汤"解表清里、主协热下利"的功效,制备葛根芩连汤三氯甲烷提取物用于缓解伊立替康所致的肠毒性,为经典名方葛根芩连汤的开发与应用提供实验依据。方法:60只小鼠随机分为正常组、模型组、洛哌丁胺组(阳性药盐... 详细信息

目的:基于经典名方葛根芩连汤"解表清里、主协热下利"的功效,制备葛根芩连汤三氯甲烷提取物用于缓解伊立替康所致的肠毒性,为经典名方葛根芩连汤的开发与应用提供实验依据。方法:60只小鼠随机分为正常组、模型组、洛哌丁胺组(阳性药盐酸洛哌丁胺胶囊,0.4 mg·kg^(-1))和葛根芩连汤三氯甲烷提取物高、低剂量组(2.3,1.16 g·kg^(-1))。采用盐酸伊立替康(CPT-11,剂量55 mg·kg^(-1))连续4 d腹腔注射制备小鼠迟发性腹泻模型,正常组注射等体积生理盐水;分别在第5天灌胃给予相应药物,正常组和模型组给予相应体积蒸馏水,连续给药5 d。观察各组小鼠的一般情况,计算腹泻指数。运用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠结肠组织病理变化,按试剂盒说明书检测结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β),环氧合酶-2(COX-2),细胞间黏附分子-1(ICAM-1),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)的含量。同时,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠结肠组织的Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),核转录因子E2相关因子2(Nrf2),紧密连接蛋白-1(ZO-1),血红素氧合酶-1(HO-1),紧密连接蛋白(Occludin)表达情况。结果:与正常组比较,模型组经腹腔注射CPT-11造模后小鼠体质量显著降低(P葛根芩连汤三氯甲烷提取物高、低剂量组可缓解小鼠体质量降低,且腹泻指数明显下降;TNF-α,IL-1β,COX-2,ICAM-1,MDA,NO水平降低,GSH-Px和SOD含量显著上升;HE染色显示,葛根芩连汤三氯甲烷提取物高、低剂量组细胞紧密排列,胞核清晰;结肠组织屏障功能相关蛋白Keap1,Nrf2,HO-1,Occludin,ZO-1表达升高。结论:葛根芩连汤三氯甲烷提取物可能通过调节炎症及氧化应激来增强肠道屏障功能,进而缓解CPT-11所致迟发性腹泻,可为中药缓解化疗药物的毒副作用提供参考,并且为经典名方的开发提供依据。

关键词：葛根芩连汤盐酸伊立替康(CPT-11) 肠毒性氧化应激炎症迟发性腹泻洛哌丁胺肿瘤

葛根芩连汤不同部位及其组合对胰岛素抵抗大鼠ADIPOR/AMPK信号通路的影响

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中国现代应用药学 2022年第14期39卷 1828-1834页

作者：郝鹏飞母梦雨卞华黄显章张超云南阳理工学院河南省张仲景方药与免疫调节重点实验室河南南阳473000

目的考察葛根芩连汤不同部位单用及联用对胰岛素抵抗大鼠的药理活性及对ADIPOR/AMPK通路的影响,阐明葛根芩连汤防治胰岛素抵抗的药效物质基础。方法葛根芩连汤分为总黄酮、总皂苷、总生物碱和总多糖部位,考察各个不同部位单用对胰岛... 详细信息

目的考察葛根芩连汤不同部位单用及联用对胰岛素抵抗大鼠的药理活性及对ADIPOR/AMPK通路的影响,阐明葛根芩连汤防治胰岛素抵抗的药效物质基础。方法葛根芩连汤分为总黄酮、总皂苷、总生物碱和总多糖部位,考察各个不同部位单用对胰岛素抵抗大鼠的体态、血脂四项、胰岛素抵抗指数和胰岛素敏感指数的影响,综合分析筛选活性部位;再将活性部位组合给药,通过ELISA和Westernblotting试验考察不同部位单用及联用对ADIPOR/AMPK信号通路的影响。结果葛根芩连汤中总黄酮、总生物碱均可显著改善胰岛素抵抗大鼠异常的体态、血脂四项及胰岛素抵抗状态,总皂苷可显著降低胰岛素抵抗大鼠的TC、LDL-C、INS的含量,对其他指标的影响不具有统计学意义,故而将总黄酮、总生物碱、总皂苷组合后给药,考察部位间的交互作用。结果表明,总黄酮、总生物碱单用及联用时,均可显著提升胰岛素抵抗大鼠肝组织中ADIPOR、CaMKK2、AMPKα、p-AMPK的表达,显著抑制SREBP1的表达,且总黄酮与总皂苷、总生物碱与总皂苷联用时作用增强,对ADIPOR、CaMKK2、AMPKα、p-AMPK的影响与三者单用时差异有统计学意义,表明总黄酮与总皂苷、总生物碱与总皂苷之间存在有一定的交互作用。结论葛根芩连汤防治胰岛素抵抗的机制可能是通过总黄酮、总生物碱与总皂苷协同激活ADIPOR/AMPK信号通路实现的。

关键词：葛根芩连汤活性部位胰岛素抵抗脂联素受体 AMP依赖的蛋白激酶

葛根芩连汤及其发酵产物干预2型糖尿病大鼠的~1H-NMR代谢组学研究

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中草药 2018年第10期49卷 2302-2311页

作者：杜晨晖李津闫艳张敏李爱平秦雪梅宋强山西中医药大学中药学院山西太原030619 山西大学中医药现代研究中心山西太原030006

目的采用氢核磁共振(1H-NMR)代谢组学技术分析2型糖尿病(T2DM)大鼠血清中内源性代谢物的变化,比较葛根芩连汤(GQD)与发酵GQD对其干预作用。方法采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)复制T2DM大鼠模型,分别ig给予GOD与发酵GOD,共给药8周... 详细信息

目的采用氢核磁共振(1H-NMR)代谢组学技术分析2型糖尿病(T2DM)大鼠血清中内源性代谢物的变化,比较葛根芩连汤(GQD)与发酵GQD对其干预作用。方法采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)复制T2DM大鼠模型,分别ig给予GOD与发酵GOD,共给药8周。观察大鼠一般情况并测定其体质量及空腹血糖(FBG);收集大鼠血清样品,对血清1H-NMR图谱进行归属;结合多元统计分析方法,筛选可能的潜在生物标志物。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量减小、FBG升高;GQD与发酵GQD均能改善T2DM大鼠一般情况、体质量和FBG。主成分分析结果显示,对照组、模型组与给药组的代谢轮廓明显区分,并鉴定了15个与T2DM相关的潜在生物标志物。与对照组比较,模型组大鼠血清中3-羟基丁酸、胆碱、甘氨酸、甘油、β-葡萄糖和α-葡萄糖的含量升高,乳酸、极低密度脂蛋白、氧化三甲胺、醋酸、谷氨酸、蛋氨酸、谷氨酰胺、丙酮酸和肌酸的含量降低。GQD和发酵GQD干预后均能不同程度地回调已鉴定的所有标志物。结论GQD和发酵GQD均可通过调节能量代谢、脂质代谢和氨基酸代谢等途径而发挥治疗T2MD作用,未表现出显著差异,从代谢组学的角度为发酵GQD的临床应用提供了实验数据和理论基础。

关键词：葛根芩连汤发酵 2型糖尿病核磁共振代谢组学

葛根芩连汤对腹泻型肠易激综合征大鼠肠道菌群的影响

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中国中药杂志 2022年第24期47卷 6709-6719页

作者：张儒奇方志安韩文庆荆季群刘艳于斌王荣孙闵济宁医学院山东济宁272067

探讨葛根芩连汤对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with diarrhea, IBS-D)大鼠肠道菌群的干预效果。将36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组:正常组,模型组,利福昔明组(150 mg·kg^(-1)),葛根芩连汤高(8.125 g·kg^(-1))、... 详细信息

探讨葛根芩连汤对腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with diarrhea, IBS-D)大鼠肠道菌群的干预效果。将36只雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组:正常组,模型组,利福昔明组(150 mg·kg^(-1)),葛根芩连汤高(8.125 g·kg^(-1))、中(4.062 5 g·kg^(-1))、低剂量组(2.031 3 g·kg^(-1)),每组6只。构建IBS-D大鼠模型,干预治疗8 d,观察大鼠一般状态和粪便性状评分、腹部收缩最小容量阈值;行HE染色观察结肠组织的病理学变化;利用16S rRNA测序观察肠道菌群变化。结果显示,与模型组比较,利福昔明组、葛根芩连汤高剂量组、葛根芩连汤中剂量组粪便性状评分均明显降低(P葛根芩连汤干预后可以减轻肠道炎症。16S rRNA测序分析发现,IBS-D大鼠肠道菌群发生明显改变;葛根芩连汤干预后显著提高肠道菌群的丰富度指数与多样性指数,调节菌群物种数量,改善alpha多样性与beta多样性。肠道菌群物种组成及LEfSe分析显示,葛根芩连汤可以显著提高拟杆菌门Bacteroidota与厚壁菌门Firmicutes的比值,增加梭菌纲Clostridia、毛螺菌目Lachnospirales等益生菌丰度,减少拟杆菌目Bacteroidales、普雷沃菌科Prevotellaceae等条件致病菌丰度。PICRUSt2功能预测分析显示,葛根芩连汤主要与碳水化合物代谢、氨基酸代谢等多种代谢途径有关。综上所述,葛根芩连汤能够显著降低IBS-D大鼠内脏高敏性,减轻肠道炎症,改善腹泻等临床症状,其机制可能是通过调节肠道菌群组成结构并改善其代谢途径而发挥功效。

关键词：腹泻型肠易激综合征葛根芩连汤肠道菌群利福昔明 16S rRNA 内脏高敏性

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葛根芩连汤及不同配伍组中黄酮类成分的肠外翻吸收研究

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中国中药杂志 2011年第23期36卷 3332-3337页

作者：张华安叡徐冉驰张艺竹张伯莎王新宏上海中医药大学上海201203

目的:应用肠外翻模型研究葛根芩连汤及不同配伍组中黄酮类成分在大鼠不同肠段的吸收特征。方法:采用大鼠肠外翻模型,考察葛根芩连汤中黄酮类成分(葛根素、大豆苷、甘草苷、野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷)的肠吸收机制以及不同肠段、药物... 详细信息

目的:应用肠外翻模型研究葛根芩连汤及不同配伍组中黄酮类成分在大鼠不同肠段的吸收特征。方法:采用大鼠肠外翻模型,考察葛根芩连汤中黄酮类成分(葛根素、大豆苷、甘草苷、野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷)的肠吸收机制以及不同肠段、药物浓度等因素对它们吸收的影响,比较各组分在全方和不同配伍组给药时的吸收变化情况。结果:各成分在不同肠段的吸收均为线性吸收,其R2均大于0.9,符合零级吸收速率。葛根素、大豆苷、甘草苷、野黄芩苷在各肠段的吸收方式除被动扩散外还存在主动转运。黄芩苷、汉黄芩苷的吸收速率常数(Ka)均随剂量的增加而增加,显示它们为被动扩散。肠道不同部位的吸收实验表明,葛根素、大豆苷、野黄芩苷、汉黄芩苷的最佳吸收部位为空肠;甘草苷、黄芩苷的最佳吸收部位为结肠。比较全方及不同配伍组的Ka,葛根素、大豆苷、甘草苷、黄芩苷在全方中吸收较好;葛根芩连组中野黄芩苷、汉黄芩苷在十二指肠的吸收较好,其他肠段则是全方组中的吸收较好。结论:肠囊对各成分的吸收有选择,不同配伍组间各组分的肠吸收有所变化,但在全方中吸收较好。

关键词：肠外翻葛根芩连汤配伍黄酮

葛根芩连汤中14种功效成分在大鼠体内的组织分布

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中国实验方剂学杂志 2019年第10期25卷 93-101页

作者：刘昌顺晋臻陈飞龙谭晓梅南方医科大学中医药学院广东省中药制剂重点实验室广东省中药制剂技术工程实验室广州510515

目的:研究葛根芩连汤(GQT)功效成分在大鼠体内的组织分布特征,通过方药功效成分在体内各组织中的靶向性揭示其作用机制。方法:大鼠给予GQT后不同时间点取组织(小肠、大肠、肝、心、脾、肺、肾),样品处理后采用HPLC-MS/MS分析14种功效成... 详细信息

目的:研究葛根芩连汤(GQT)功效成分在大鼠体内的组织分布特征,通过方药功效成分在体内各组织中的靶向性揭示其作用机制。方法:大鼠给予GQT后不同时间点取组织(小肠、大肠、肝、心、脾、肺、肾),样品处理后采用HPLC-MS/MS分析14种功效成分在各组织匀浆液中的含量,Agilent ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(2. 1 mm×100 mm,3. 5μm),流动相0. 1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速0. 4 m L·min^(-1),电喷雾离子源,正离子模式检测,选择柚皮苷作为内标物。结果:建立了同时测定组织匀浆液中14种GQT主要功效成分的HPLC-MS/MS分析方法,该方法的专属性、标准曲线、回收率、基质效应、精密度、准确度和稳定性良好。在小肠组织中,异黄酮类主要成分葛根素、大豆苷元和3’-羟基葛根素的药时曲线下面积(AUC_(0-10 h))分别为22 174. 9,3 882. 5,15 893. 1 h·mg·L^(-1),黄酮类主要成分黄芩素、汉黄芩素、汉黄芩苷和黄芩苷的AUC_(0-10 h)分别为15 423. 6,15 408. 4,7 017. 3,3 697. 7 h·mg·L^(-1),生物碱类主要成分小檗碱的AUC_(0-10 h)=2 544. 0 h·mg·L^(-1),这些成分在小肠组织的分布水平显著高于其他组织。结论:GQT的功效成分群主要分布于肠道组织,推测其抗炎、止泻的药理作用可能与其成分在肠道组织的作用趋向相关。

关键词：葛根芩连汤功效成分组织分布作用靶向生物碱黄酮类异黄酮类

葛根芩连汤激活PPARγ上调脂联素和GLUT4表达改善脂肪胰岛素抵抗

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中国中药杂志 2017年第23期42卷 4641-4648页

作者：罗新新朱水兰李冰涛史秀明涂珺江西中医药大学中医基础理论分化发展研究中心江西省中医病因学重点实验室江西南昌330004

该实验研究复方葛根芩连汤体内外改善脂肪胰岛素抵抗(IR)的药效及相关分子机制。采用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,葛根芩连汤给药干预3个月,检测糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白,计算胰岛素抵抗指数。... 详细信息

该实验研究复方葛根芩连汤体内外改善脂肪胰岛素抵抗(IR)的药效及相关分子机制。采用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,葛根芩连汤给药干预3个月,检测糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白,计算胰岛素抵抗指数。提取大鼠脂肪组织总RNA,q PCR检测糖尿病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂联素(ADPN)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、乙酰辅酶A羧化酶α基因(ACACA)和乙酰辅酶A羧化酶β(ACACB)基因mRNA表达水平。1μmol·L^(-1)地塞米松诱导建立稳定IR-3T3-L1脂肪细胞模型,CCK-8法检测葛根芩连汤含药血清对细胞活力的影响,采用5%,10%,15%葛根芩连汤含药血清干预24 h检测细胞培养液葡萄糖含量、游离脂肪酸(NEFA)含量和外泌脂联素含量,测定细胞内甘油三酯(TG)含量。荧光定量q PCR和Western blot分别检测IR-3T3-L1细胞PPARγ,ADPN和GLUT4 mRNA和蛋白质表达水平。结果显示葛根芩连汤给药3个月可明显降低糖尿病大鼠的空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白(P葛根芩连汤可显著升高糖尿病大鼠脂肪组织PPARγ,ADPN,GLUT4,GLUT2,ACACA和ACACB基因mRNA表达水平。5%,10%,15%葛根芩连汤含药血清均可显著性上调IR-3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量(P葛根芩连汤含药血清剂量依赖上调外泌ADPN,15%含药血清上调ADPN非常显著(P葛根芩连汤激活PPARγ上调ADPN和GLUT4调节糖代谢改善脂肪IR。

关键词：葛根芩连汤脂肪胰岛素抵抗 3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ 脂联素葡萄糖转运蛋白4