中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因表达载体的构建及原核表达

作     者：木尔扎提.阿勒腾别克 刘强 贺志锐 王银龙 乌热力哈孜 赛务加甫 MU Er zha tiA le teng bie ke;LIU Qiang;HE Zhi-rui;WANG Yin-long;WU Re lihazi;SAI Wujiafu

作者机构：石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2014年第35卷第12期

页      面：104-109页

学科分类：0710[理学-生物学] 090601[农学-基础兽医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31160524) 

主　　题：磷脂酶C zeta蛋白 原核表达 Western blot 

摘      要：构建美利奴绵羊磷脂酶C zeta(PLCζ)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化,为其特异性抗体的制备及生物学功能研究奠定基础。用PCR技术扩增出PLCζ基因片段,亚克隆到原核表达载体pCzn1中,导入Arctic Express TM(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,收样后进行SDS-PAGE电泳或Western blot检验PLCζ的表达情况。用镍离子亲和层析的方法大量纯化融合蛋白。结果显示,重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。pCzn1表达载体在Arctic Express TM(DE3)表达菌中能很好地表达融合蛋白。表达纯化后可获得了分子量约74ku的融合蛋白,符合预期大小。成功构建pCzn1-PLCζ原核表达载体,表达并纯化了其融合蛋白,Western blot试验表明其蛋白分子的完整性良好,这将有利于对PLCζ蛋白进行深入的研究。