抗骨肉瘤细胞系MG63特异性单链抗体的制备及功能鉴定

作     者：谢柏臻 姚琴 华强 赵慧毅 XIE Baizhen;YAO Qin;HUA Qiang;ZHAO Huiyi

作者机构：厦门大学附属中山医院脊柱外科361004 厦门大学附属中山医院中心实验室361004 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2014年第30卷第9期

页      面：759-763页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：福建省自然科学基金青年创新项目(2010D017) 

主　　题：噬菌体抗体库 单链抗体 可溶性表达 骨肉瘤细胞MG63 

摘      要：目的从全人源噬菌体抗体库中筛选与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的单链抗体（scFv）并进行表达、纯化及鉴定。方法采用噬菌体表面展示技术,以正常人成骨细胞系hFOBl.19为阴性筛选细胞,人骨肉瘤细胞系MG63为阳性筛选细胞,经过＂吸附-洗脱-扩增＂过程筛选并富集特异性抗体,ELISA检测并进行PCR扩增及测序鉴定。获得的阳性噬菌体感染大肠杆菌HB2151,IPTG诱导后经镍亲和层析柱纯化,用SDS-PAGE鉴定表达、纯化效果,ELISA检测可溶性特异性单链抗体的亲和力、特异性及稳定性。MTT法检测纯化后的单链抗体对骨肉瘤细胞MG63增殖的影响。结果通过筛选、PCR扩增和序列分析确定scFv4的片段包含免疫球蛋白序列,其表达产物可与抗原结合;纯化后的单链抗体对骨肉瘤细胞MG63增殖有明显的抑制作用,且其抑瘤作用与质量浓度成正相关。未加蛋白保护剂的纯化抗体4℃下其抗体活性可保持约5周,添加蛋白保护剂的纯化抗体则可在4℃下保持6-7周。结论利用噬菌体表面展示技术成功筛选出能与人骨肉瘤细胞MG63特异性结合的scFv,在大肠杆菌中成功表达并获得基因序列,抗体能抑制MG63细胞的增殖且稳定性良好。