基于Akt/Nrf2/GPX4信号通路探究养血柔筋方含药血清对IL-1β致大鼠退变软骨细胞铁死亡的影响

作     者：沈锦涛 华茂奇 张北 朱云麒 王上增 

作者机构：河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院 河南中医药大学 

出 版 物：《中药材》 (Journal of Chinese Medicinal Materials)

年 卷 期：2024年

页      面：1793-1799页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：河南省体育局2023年体育课题研究项目(202301) 河南省卫生健康委国家中医临床研究基地科研专项(2021JDZX2039) 河南中医药大学2021年度“科研苗圃工程”项目(MP2020-9) 

主　　题：养血柔筋方含药血清 膝骨关节炎 铁死亡 Akt/Nrf2/GPX4信号通路 

摘      要：目的:探究养血柔筋方含药血清对Nrf2/GPX4信号通路的影响。方法:30只雄性Wistar大鼠分别连续灌胃给予低（9.18 g/kg）、中（18.36 g/kg）、高（36.72 g/kg）剂量养血柔筋方,2 w后收集血清。分离软骨细胞,（1）为研究铁死亡在IL-1β致软骨细胞死亡中的影响,在软骨细胞培养过程中分别加入50、100μmol/L的铁离子螯合剂;（2）为研究养血柔筋方含药血清在IL-1β诱导软骨细胞损伤中的作用,将所分离的细胞分为正常对照组、模型组及低、中、高剂量养血柔筋方含药血清组;（3）为研究Akt/Nrf2/GPX4信号在养血柔筋方含药血清改善软骨细胞铁死亡中的作用,培养过程中加入PI3K抑制剂（LY294002）,分为正常对照组、模型组、养血柔筋方含药血清组、养血柔筋方含药血清+LY294002组。CCK-8法检测细胞存活率;试剂盒检测Fe2+含量和MDA水平;流式细胞术检测ROS水平;Western Blot检测GPX4、p-Akt、Nrf2蛋白表达;免疫荧光法检测GPX4、MMP-13、CollagenⅡ蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组细胞存活率、GPX4、p-Akt、Nrf2、CollagenⅡ蛋白表达显著降低,Fe2+、MDA、ROS含量及MMP-13蛋白表达显著升高（P0.05）;与模型组比较,铁离子螯合剂组细胞存活率显著升高,Fe2+、MDA水平显著降低（P0.05）。与模型组比较,各剂量养血柔筋方含药血清组细胞存活率、GPX4、p-Akt、Nrf2、CollagenⅡ蛋白表达显著升高,Fe2+、MDA、ROS含量及MMP-13蛋白表达显著降低（P0.05）。与养血柔筋方含药血清组比较,养血柔筋方含药血清+LY294002组细胞存活率、GPX4、p-Akt、Nrf2、CollagenⅡ蛋白表达显著降低,MMP-13蛋白表达及MDA、Fe2+含量显著升高（P0.05）。结论:养血柔筋方含药血清可通过激活Akt/Nrf2/GPX4信号通路抑制膝骨关节炎软骨细胞铁死亡。