鲤疱疹病毒Ⅱ型ORF72单克隆抗体的制备及应用

作     者：徐超楠 孙雨雨 王佳 郭宝琴 魏畅 李强 XU Chaonan;SUN Yuyu;WANG Jia;GUO Baoqin;WEI Chang;LI Qiang

作者机构：大连海洋大学水产与生命学院辽宁大连116023 盐城工学院海洋与生物工程学院江苏盐城224051 

出 版 物：《水产科学》 (Fisheries Science)

年 卷 期：2024年第43卷第4期

页      面：598-605页

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(32102849) 江苏省重点研发计划(BE2021326) 

主　　题：异育银鲫 鲤疱疹病毒Ⅱ型 ORF72 单克隆抗体 间接免疫荧光 

摘      要：鲤疱疹病毒Ⅱ型是引起鲫造血器官坏死病的重要病原。为建立基于抗原水平的免疫检测方法,通过原核表达方法制备鲤疱疹病毒Ⅱ型核衣壳蛋白ORF72,将纯化的ORF72蛋白免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术筛选获得单克隆抗体1B3、4B1、4C2、5F4和5H9。免疫印迹分析显示,上述5株单抗均可特异性识别重组蛋白ORF72;免疫荧光分析显示,仅单抗4C2可与感染鲤疱疹病毒Ⅱ型的鲫脾脏发生阳性反应。利用单抗4C2通过间接免疫荧光技术对鲤疱疹病毒Ⅱ型感染鎏金金鱼鳍条细胞系(RyuF-2)后ORF72蛋白表达情况进行检测,结果显示,感染后36 h可检测到阳性信号,并且随着感染时间的延长,细胞中ORF72的表达量明显增加。本试验制备的单克隆抗体4C2为体外进一步探究鲤疱疹病毒Ⅱ型在细胞内的复制机制及建立病鱼免疫检测手段奠定了基础。