骨桥蛋白促进腹膜透析相关腹膜纤维化的作用研究

作     者：张玉婷 王宏 谢大洋 张庆涛 周建辉 

作者机构：解放军总医院第一医学中心肾脏病医学部肾脏疾病全国重点实验室国家慢性肾病临床医学研究中心肾脏疾病研究北京市重点实验室 

出 版 物：《解放军医学院学报》 (Academic Journal of Chinese PLA Medical School)

年 卷 期：2024年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主　　题：腹膜透析 腹膜纤维化 骨桥蛋白 巨噬细胞 小干扰RNA 

摘      要：背景腹膜纤维化是腹膜透析(Peritoneal dialysis,PD)超滤衰竭最常见的原因，骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在其他器官中起到促纤维化作用，但其在腹膜透析相关腹膜纤维化中的作用尚未被证实。目的 证明骨桥蛋白促进腹膜透析相关腹膜纤维化发展。方法 体外分别使用1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL的骨桥蛋白刺激人腹膜间皮细胞，观察间皮细胞形态。体外培养小鼠巨噬细胞，0.5μg/mL脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激，检测骨桥蛋白的表达。对3种siRNA序列进行筛选，用筛选得到的序列合成体内用siRNA。将20只小鼠随机分成4组：生理盐水对照组、腹膜透析对照组、siRNA载体对照组和siRNA实验组，每组5只。造模方式为：生理盐水组给小鼠腹腔注射100 mL/kg生理盐水，每日一次；腹膜透析对照组给小鼠腹腔注射100 mL/kg含有4.25%葡萄糖的腹膜透析液，每日一次；siRNA载体组和siRNA实验组在进行每日100 mL/kg含有4.25%葡萄糖的腹膜透析液注射的同时，将5 nmol体内用siRNA空载体或5 nmol体内用siRNA溶解至腹膜透析液中进行腹腔注射，每3日一次；所有动物模型均造模4周。取小鼠右侧壁腹膜组织，通过病理切片测量壁腹膜厚度、间皮下胶原纤维面积和微血管数量，WB检测α-SMA和E-钙黏蛋白表达量以及免疫组化进行α-SAM染色，评估腹膜纤维化程度。结果 添加外源性骨桥蛋白刺激后，人腹膜间皮细胞排列杂乱，细胞形状变细长，向外延伸出角状，呈间充质样改变。LPS刺激的巨噬细胞中骨桥蛋白表达增加(P 0.05)。siRNA转染后抑制骨桥蛋白表达，其中si-002添加后骨桥蛋白减少较多(P 0.05)。在腹膜透析对照组中，使用CD68、骨桥蛋白进行免疫荧光共染色，证实骨桥蛋白在巨噬细胞中表达。与腹膜透析对照组相比，siRNA实验组壁腹膜间皮下厚度减少(P 0.05)，间皮下微血管数量减少(P 0.05)，胶原蛋白沉积面积减少(P 0.05)，壁腹膜组织中α-SMA表达减少，E-钙黏蛋白表达增加(P 0.05)。结论 抑制腹膜骨桥蛋白表达可以减缓腹膜透析相关腹膜纤维化。