小鼠CTSK敲降重组腺相关病毒的构建及其功能研究

作     者：何静 禚鑫喆 邹欣雨 王梦凡 王秀云 He Jing;Zhuo Xinzhe;Zou Xinyu;Wang Mengfan;Wang Xiuyun

作者机构：安徽医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室合肥230032 

出 版 物：《安徽医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Anhui)

年 卷 期：2024年第59卷第6期

页      面：1001-1005页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金青年项目(编号:82300659) 安徽省自然科学基金青年项目(编号:2308085QH247) 安徽医科大学校科研基金青年项目(编号:2021xkj006) 安徽高校自然科学研究项目重点项目(编号:KJ2021A0220) 

主　　题：CTSK 腺相关病毒 脂肪组织原位注射 

摘      要：目的构建小鼠组织蛋白酶K(CTSK)基因的敲降重组腺相关病毒(AAV-shCTSK),检测AAV-shCTSK在小鼠体内的敲降效率,及其对脂肪组织脂质储存的影响。方法设计阴性对照组(NC)及CTSK的shRNA引物,退火后插入到骨架载体中,挑选克隆并测序鉴定,重组质粒经纯化后,利用转染试剂PEI将构建好的腺相关病毒载体、包装质粒和辅助质粒共转染到293T细胞中,进行腺相关病毒包装与扩增,得到AAV-shNC以及AAV-shCTSK。利用脂肪组织原位注射将AAV病毒注射入小鼠附睾脂肪组织,2周后免疫印迹实验检测小鼠脂肪组织中CTSK蛋白的表达量及HE染色检测脂肪组织中脂滴大小。结果成功获得AAV-shNC以及AAV-shCTSK腺相关病毒。原位注射AAV-shCTSK的小鼠脂肪组织中CTSK成功敲降,脂肪组织中白色脂肪细胞显著变小。结论小鼠CTSK的敲降腺相关病毒构建成功,脂肪组织CTSK敲降引起脂肪组织中脂质含量减少。