盲肠结扎穿孔术诱发的脓毒症对肠道干细胞增殖和分化的影响

作     者：张学鹏 付建垒 刘茂霞 张赓 邱桐 周江元 张梓欣 龚雪 付沁怡 吉毅 陈思源 Zhang Xuepeng;Fu Jianlei;Liu Maoxia;Zhang Geng;Qiu Tong;Zhou Jiangyuan;Zhang Zixin;Gong Xue;Fu Qinyi;Ji Yi;Chen Siyuan

作者机构：四川大学华西医院重症医学科成都610041 四川大学华西医院小儿外科成都610041 

出 版 物：《中华危重病急救医学》 (Chinese Critical Care Medicine)

年 卷 期：2024年第36卷第5期

页      面：496-502页

核心收录：

学科分类：100218[医学-急诊医学] 1002[医学-临床医学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：四川省科技计划重点研发项目(2022YFS0225) 

主　　题：脓毒症 盲肠结扎穿孔术 肠上皮 增殖 分化 

摘      要：目的分析盲肠结扎穿孔术(CLP)诱导的脓毒症对肠上皮细胞增殖和分化的影响。方法①动物实验:将16只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)和CLP致脓毒症模型组(CLP组),每组8只。术后5 d取空肠组织,用聚合酶链反应(PCR)检测富亮氨酸重复序列G蛋白耦联受体5(LGR5)和肠型碱性磷酸酶(IAP)的转录表达水平;用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测LGR5的翻译水平;用免疫组化法分析增殖细胞核抗原(Ki67)的表达;用改良钙钴染色法和比色法检测组织IAP水平;免疫荧光法检测肠道潘氏细胞标记分子溶菌酶1(LYZ1)和杯状细胞标记分子黏蛋白2(MUC2)的表达。②细胞实验:取对数生长期的大鼠小肠隐窝细胞(IEC6细胞),并分为空白对照组和脂多糖(LPS)组(LPS 5μg/mL)。24 h后分别用PCR和Western blotting检测LGR5的转录和翻译水平;用5-乙炔基-2 -脱氧尿苷(EdU)染色检测IEC6细胞增殖情况;分别用PCR和比色法检测IAP的转录和翻译水平。结果①动物实验:免疫组化结果显示,CLP组小鼠空肠组织Ki67染色阳性率低于Sham组〔(41.7±2.5)%比(48.7±1.4)%,P=0.01〕。PCR和Western blotting结果显示,CLP组与Sham组小鼠空肠组织LGR5表达差异均无统计学意义(Lgr5 mRNA:0.7±0.1比1.0±0.2,P=0.11;LGR5/β-actin:0.83±0.17比0.68±0.19,P=0.24);CLP组小鼠空肠组织IAP在转录水平(0.4±0.1比1.0±0.1,P0.01)和蛋白水平(U/g:47.3±6.0比73.1±15.3,P0.01)均低于Sham组。免疫荧光显示,CLP组小鼠空肠组织LYZ1、MUC2的表达水平均低于Sham组。②细胞实验:PCR和Western blotting结果显示,LPS组与空白对照组IEC6细胞LGR5表达水平差异无统计学意义(Lgr5 mRNA:0.9±0.1比1.0±0.2,P=0.33;LGR5/β-actin:0.71±0.18比0.69±0.04,P=0.81)。LPS组IEC6细胞增殖率低于空白对照组,但差异无统计学意义〔EdU阳性率:(40.5±3.8)%比(46.5±3.6)%,P=0.11〕。LPS组IAP转录水平(0.5±0.1比1.0±0.2,P0.01)和蛋白水平(U/g:15.0±4.0比41.2±10.4,P0.01)均低于空白对照组。结论CLP诱发的脓毒症可抑制肠上皮细胞的增殖和分化,损伤肠上皮自我更新的能力。