构建链霉菌小型基因文库的新型正选择克隆载体

作     者：马超 朱宇鹏 尚广东 Ma Chao;Zhu Yu-Peng;Shang Guang-dong

作者机构：江苏省微生物工程技术研究中心江苏省生物多样性与生物技术重点实验室南京师范大学生命科学学院南京210046 

出 版 物：《中国抗生素杂志》 (Chinese Journal of Antibiotics)

年 卷 期：2010年第35卷第11期

页      面：835-839页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：重大新药创制(No.2009ZX09503-005) 

主　　题：正选择克隆载体 链霉菌 小型基因文库 rpsL基因 链霉素 

摘      要：目的构建链霉菌小型基因文库是获得链霉菌基因的一个重要手段,常规使用的克隆载体常有着一定程度的假阳性,因此构建的高效率的克隆载体有着实际的意义。方法本研究通过重叠延伸PCR手段将一个96bp的多克隆位点序列插入至rpsL基因的启动子和开放阅读框之间,将此DNA片段克隆至pBluescript KS（-）而获得了新型的正选择克隆载体pLS975。结果 pLS975有18个酶切位点可用于外源DNA片段的克隆,重组克隆以氨苄青霉素抗性和链霉素抗性进行筛选,宿主菌为链霉素抗性菌株如Escherichia coli DH10B。两个小型基因文库的制备显示pLS975具有很高的克隆效率（96%~100%）。结论 pLS975可成为构建链霉菌小型基因文库的良好载体。