猪流行性腹泻病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：董苏洁 孔宁 秦文珍 翟焕杰 翟雪滢 杨心雨 童武 郑浩 于海 童光志 李有文 单同领 DONG Sujie;KONG Ning;QIN Wenzhen;ZHAI Huanjie;ZHAI Xueying;YANG Xinyu;TONG Wu;ZHENG Hao;YU Hai;TONG Guangzhi;LI Youwen;SHAN Tongling

作者机构：塔里木大学动物科学与技术学院阿拉尔843300 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2024年第32卷第2期

页      面：174-180页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金(31872478,32102665,31760741) 上海自然科学基金(19ZR1469100) 

主　　题：猪流行性腹泻病毒 N基因 SYBR Green I 荧光定量PCR 

摘      要：为了建立高效、灵敏的猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测方法,本研究从GenBank数据库中获取PEDV N基因序列,扩增出PEDV N基因标准质粒,并在N基因的保守区域内设计了一对特异性荧光定量引物,成功建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。经过一系列试验表明,该检测方法线性关系良好,R^(2)值为0.99;特异性强,敏感性高,最低可检测至2.23 copies/μL,比普通PCR灵敏约100倍;重复性好,组内变异系数为0.25%~0.43%,组间变异系数为0.67%~0.97%;对于各地区96份临床样品检测出PEDV阳性率为25%。本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法为PEDV的临床诊断、流行病学调查以及定量研究提供了有效的检测工具。