三氯异氰尿酸通过诱导氧化应激和铁死亡抑制精原细胞增殖

作     者：蒋莉 韩雪 吴德生 黄海燕 刘建军 JIANG Li;HAN Xue;WU Desheng;HUANG Haiyan;LIU Jianjun

作者机构：山西医科大学公共卫生学院山西太原030000 深圳市疾病预防控制中心深圳市现代毒理学重点实验室深圳市卫生毒理学医学重点学科(2020-2024)广东深圳518055 

出 版 物：《中国药理学与毒理学杂志》 (Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology)

年 卷 期：2024年第38卷第6期

页      面：426-435页

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：深圳市医学重点学科建设经费资助(SZXK069) 

主　　题：三氯异氰尿酸 精原细胞 氧化应激 DNA甲基化 铁死亡 

摘      要：目的探索三氯异氰尿酸(TCCA)对小鼠睾丸精原细胞GC-1氧化应激和DNA甲基化的影响。方法以TCCA 0(细胞对照),97,194和387μmol·L^(-1)处理GC-1细胞24 h;CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33342染色检测各组细胞形态和凋亡率;流式法检测细胞周期;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞凋亡相关基因Bax和Fas、氧化应激相关基因线粒体超氧化物歧化酶(SOD2)、铁死亡相关基因谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)、DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)和DNA甲基转移酶3L(DNMT3L)mRNA表达水平;Griess法测定GC-1细胞一氧化氮(NO)含量,比色法测定丙二醛(MDA)水平;DCFH-DA荧光探针法测定GC-1细胞活性氧(ROS)水平,DNTB比色法测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量,WST-8法测定还原型辅酶Ⅱ(NADPH)含量。结果与细胞对照组相比,TCCA 194和387μmol·L^(-1)组细胞存活率降低(P0.01),出现细胞核固缩及核碎裂,细胞凋亡率显著增加(P0.01),细胞被阻滞在G2/M期(P0.05);TCCA 387μmol·L^(-1)组细胞NO和MDA含量增加(P0.01),ROS水平升高(P0.01),GSH和NADPH含量降低(P0.01),SOD2,GPX4,Nrf2,SLC7A11和DHODH mRNA表达减少(P0.05,P0.01);Bax,Fas,DNMT3L和DNMT3A mRNA表达增加(P0.05,P0.01)。结论TCCA可降低GC-1细胞存活率,抑制细胞增殖,引起细胞凋亡。其机制可能与其破坏抗氧化系统、增强氧化应激、诱导铁死亡及干扰GC-1细胞甲基化有关。