猪细小病毒7型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作     者：吕紫欣 张鑫杰 薛少华 黄喜荣 刘建奎 戴爱玲 

作者机构：龙岩学院生命科学学院 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福建省生猪疫病防控工程技术研究中心 福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年第14期

页      面：56-60页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：中央引导地方科技发展专项(2021L3028) 福建省科技重大专项(2019NZ09005) 龙岩市科技计划重大项目(2019LY1001) 

主　　题：猪细小病毒7型 VP2蛋白 Cap基因 原核表达 多克隆抗体 

摘      要：为了表达猪细小病毒7型(PPV7)VP2蛋白(由Cap基因编码)并制备其多克隆抗体，试验从GenBank数据库中下载PPV7 Cap基因序列，选择不同毒株的高频序列作为目的基因序列，使用T4 DNA连接酶将目的基因与pET-32a表达载体连接，将连接产物转化至DH5α感受态细胞中，并使用IPTG对重组菌进行诱导，对表达的重组蛋白进行可溶性分析与纯化并通过Western-blot检测重组蛋白的反应原性，用纯化后的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并分别通过间接ELISA方法、Western-blot检测多克隆抗体的效价及其与重组蛋白的反应性。结果表明：诱导后的重组菌在56 ku处出现明显条带，重组蛋白主要以包涵体的形式表达；纯化后的重组蛋白为单一条带，质量浓度为0.46 mg/mL,能与His标签抗体特异性结合；制备的多克隆抗体的效价为1∶51 200,能与重组蛋白特异性结合。说明PPV7 VP2蛋白获得了成功表达，该蛋白具有良好的反应原性和免疫原性，所制备的多克隆抗体效价较高。