鸽圆环病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

作     者：杨颖 路文彬 向凤君 雷白时 赵款 安峥 张武超 袁万哲 

作者机构：保定市久盟生物科技有限公司 河北农业大学动物医学院 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：河北省“三三三人才工程”项目(A20221003) 校企合作项目(3109120001) 

主　　题：鸽圆环病毒 Cap蛋白 原核表达 间接ELISA方法 

摘      要：为建立一种检测鸽圆环病毒(pigeon circovirus，PiCV)抗体的间接ELISA方法，本研究将大小为828 bp的PiCV Cap基因片段克隆至载体pGEX-4T-1，通过低温诱导获得了可溶性Cap重组蛋白，经Western-blot验证后发现，该重组蛋白与抗GST标签抗体和抗Cap蛋白抗体均可发生特异性反应。利用纯化的Cap重组蛋白作为包被抗原，通过棋盘滴定法优化各反应条件，建立了PiCV抗体间接ELISA检测方法。结果显示，最佳抗原包被浓度为0.25 mg/L，5%BSA作为封闭液37 ℃孵育2 h，待检血清最佳稀释度为1∶800，孵育时间为45 min，家兔抗鸽IgG-HRP二抗最佳稀释度为1∶8 000，孵育时间为30 min，最佳显色时间为15 min，当检测样品D450≥0.341则判定其为阳性。用该方法检测鸽腺病毒、鸽疱疹病毒、鸽Ⅰ型副黏病毒和轮状病毒的阳性血清时结果呈阴性，对稀释至1∶12 800的阳性血清进行检测时结果仍为阳性，批内和批间变异系数均小于10%。与常规PCR符合率为88.2%，用该方法对86份临床血清样品进行检测，阳性率为17.4%。综上所述，该间接ELISA方法的建立，作为一种特异性强，灵敏度高，重复性好的血清学检测方法，为后续PiCV候选疫苗免疫后抗体水平的评价及PiCV感染状况的评估提供了技术支持。