绵羊肺炎支原体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

作     者：王晓楠 张纹纹 陈思宇 单依依 陈益 李文良 程子龙 杨蕾蕾 王金泉 刘茂军 

作者机构：新疆农业大学动物医学学院 江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程技术重点实验室 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2024年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2022YFD1800603) 国家自然科学基金青年基金项目(32202809) 江苏省农业科学院探索性颠覆性项目ZX(21)1218 江苏省第五期“333高层次人才培养工程”科研项目(BRA2019092) 

主　　题：绵羊肺炎支原体 夹心ELISA 建立 

摘      要：为建立绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae，MO)的抗原快速定量检测方法，本研究通过单抗筛选和条件优化，建立了一种检测MO抗原夹心ELISA检测方法，建立的ELISA方法的最优条件为：单抗1A11 浓度为105 μg/mL，37 ℃孵育1 h后4 ℃过夜包被；用10 g/L BSA 37 ℃封闭1 h；与超声处理的样品作用1.5 h；检测抗体浓度为3.81 μg/mL，37 ℃作用2 h；酶标抗体1∶4 000稀释，37 ℃反应1.5 h；加入底物37 ℃避光反应10 min。建立的夹心ELISA方法批间和批内变异系数均低于10%，特异性、重复性、敏感性良好，本方法检测的抗原含量与MO的CCU呈正相关。本方法的建立为绵羊肺炎支原体的定量检测提供了新技术，可用于实验室MO培养物CCU含量的替代检测和MO疫苗生产过程中抗原的检测。