CRISPR/Cas9全基因组文库筛选RABV感染关键宿主因子方法的建立

作     者：张欣莹 郭建雄 王洁 涂长春 刘艳 

作者机构：农业农村部狂犬病及野生动物与人共患病诊断实验室 世界动物卫生组织狂犬病参考实验室 中国农业科学院长春兽医研究所 东北师范大学生命科学学院 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2024年

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(32273093,31972720) 国家重点研发计划(2022YFD1800100) 

主　　题：狂犬病病毒 CRISPR/Cas9全基因组敲除文库 感染复制关键因子 筛选方法 

摘      要：狂犬病病毒（rabies virus，RABV）是一种高度致死的嗜神经病毒，能够感染人与温血动物引起狂犬病（Rabies），目前尚无有效救治靶点。为了全面高效地发掘介导RABV感染致病的关键宿主靶点，本研究利用CRISPR/Cas9全基因组文库建立了RABV感染依赖性宿主因子的筛选方法。结果表明：利用CRISPR/Cas9全基因组敲除慢病毒感染RABV易感细胞HEK-293，经嘌呤霉素压力筛选获得全基因组敲除细胞库。利用携带绿色荧光报告基因的重组毒株CVS11-eGFP感染敲除细胞库，48小时后进行流式分选获得绿色荧光强度极弱的细胞。经细胞克隆分离培养与不同RABV毒株的二次感染验证，获得两株不感染RABV的基因编辑细胞克隆KL-4与KL-14。本研究建立了利用CRISPR/Cas9全基因组敲除文库对介导RABV感染复制的关键宿主因子进行系统筛选的方法，为从宿主基因组层面发掘狂犬病救治的关键靶点提供了新的技术支撑。