S100A16启动子区DNA甲基化在小细胞肺癌细胞增殖及化疗耐药中的调控作用

作     者：叶瑞芳 黄彩玲 林潍轩 方曼霖 甘思远 李汝佳 冯娜 郭琳琅 熊英环 孙艳芹 YE Ruifang;HUANG Cailing;LIN Weixuan;FANG Manlin;GAN Siyuan;LI Rujia;FENG Na;GUO Linlang;XIONG Yinghuan;SUN Yanqin

作者机构：广东医科大学第一临床医学院广东湛江524023 广东医科大学病理学系 东莞东华医院病理科 南方医科大学珠江医院病理科 广东医科大学附属医院生物样本库 广东医科大学实验动物中心 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2024年第19卷第5期

页      面：528-533页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81702285) 广东省基础与应用基础研究基金(No.2021B1515140067,2022A1515012190) 广东省医学科学技术研究基金项目(No.A2022019,A2023338) 湛江市科技发展专项资金竞争性分配项目(No.2022A01018) 大学生创新创业训练计划项目(No.S202210571082,202210571036) 广东医科大学松山湖医工融合创新中心专项项目(No.4SG22312P) 

主　　题：小细胞肺癌 S100A16 化疗耐药 DNA甲基化 

摘      要：目的探讨S100钙结合蛋白A16(S100 calcium binding protein A16,S100A16)对小细胞肺癌细胞增殖、凋亡和化疗耐药性的影响,并揭示S100A16启动子区低甲基化在小细胞肺癌恶性表型中的潜在作用。方法结合生物信息学分析,采用RNA干扰技术降低H69AR细胞中S100A16的表达,使用RT-qPCR、Western blot、CCK-8实验、流式细胞术及免疫组化法分析S100A16在小细胞肺癌各种恶性表型中的调控作用。结果生物信息学在线数据分析发现,小细胞肺癌细胞易对化疗药物顺铂产生抵抗性,其持久耐药(Drug tolerant persister,DTP)细胞株中S100A16启动子区甲基化水平相对较低,与其mRNA表达水平呈负相关(P0.05)。基于上述生信分析结果,我们进一步经实验验证发现,与小细胞肺癌化疗敏感细胞相比,S100A16在小细胞肺癌化疗耐药株中的表达较高(P0.05);采用siRNA技术沉默化疗耐药细胞H69AR中S100A16的表达后,CCK-8实验分析发现细胞贴壁生长60 h后增殖能力明显下降(P0.05),流式细胞术分析发现细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均呈升高趋势(P0.05)。为了探究S100A16表达改变与小细胞肺癌恶性表型间的分子机制,采用MassARRAY平台系统进行基因甲基化位点检测发现,癌组织中S100A16基因启动子区CpG-8甲基化水平显著较低(P0.01),进一步采用去甲基化药物5-阿扎胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR)处理H69细胞后发现,DNA甲基转移酶DNMT3A明显下降(P0.05)而S100A16的表达相对显著升高(P0.01)。结论启动子区DNA低甲基化会导致S100A16在小细胞肺癌中高表达,能够进一步促进肿瘤发生发展,并且在化疗耐药中发挥一定作用。