落叶松尺蛾核型多角体病毒形态特征及分子检测技术建立

作     者：王少博 谢丹洁 张泽辉 刘云朋 孔德治 王青华 曲良建 Wang Shaobo;Xie Danjie;Zhang Zehui;Liu Yunpeng;Kong Dezhi;Wang qinghua;Qu Liangjian

作者机构：中国林业科学研究院森林生态环境与自然保护研究所国家林业和草原局森林保护学重点实验室北京100091 北京蓝狐天敌技术有限公司北京100089 河北省塞罕坝机械林场北曼甸分场河北围场068450 

出 版 物：《陆地生态系统与保护学报》 (Terrestrial Ecosystem and Conservation)

年 卷 期：2024年第4卷第1期

页      面：59-65页

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 

基　　金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(CAFYBB2022ZB001 CAFYBB2020SY022) 

主　　题：落叶松尺蛾 核型多角体病毒 扫描电镜 透射电镜 PCR检测 

摘      要：【目的】落叶松尺蛾核型多角体病毒(Erannis ankeraria nucleopolyhedrovirus,EranNPV)是有效调控落叶松尺蛾种群数量和质量的重要生物因子,明确EranNPV超微形态学结构,研究并建立其精准灵敏的分子(PCR)快速检测技术,有助于深入探究该病毒的传播机制和林间流行规律,从而为利用该病毒持续控制落叶松尺蛾提供技术支撑。【方法】利用扫描电镜和透射电镜对EranNPV多角体的外部形态和内部结构特征进行观察;根据EranNPV的ac54基因设计用于PCR检测的特异性引物EaV,通过多种昆虫病毒的PCR扩增结果验证引物特异性,测试该PCR检测技术体系对EranNPV基因组DNA和病毒悬浮液的灵敏性。【结果】电镜观察结果表明,该病毒多角体多为表面光滑的不规则多面体,少数多角体表面散布孔洞凹陷,平均直径为1.43±0.20μm,多角体内的病毒粒子呈单束分布,平均长度为219.14±17.50 nm;以EaV为引物,只有EranNPV能够扩增到目的条带,利用EaV为引物建立的PCR检测技术对EranNPV基因组DNA的检测灵敏度可达10 fg/mL,对EranNPV悬浮液的检测灵敏度可达1×102 OBs/mL。【结论】EranNPV为典型的单粒包埋型核型多角体病毒,利用EaV引物建立的PCR检测技术具有高度的特异性和灵敏度,有望进一步应用于EranNPV的林间传播和流行病学研究当中。