嗜水气单胞菌外膜蛋白ompA基因的原核表达及免疫保护性研究

作     者：郑宗林 郑曙明 Delbert M. Gatlin Ⅲ 汪开毓 

作者机构：水产动物繁育和健康养殖研究中心西南大学荣昌校区重庆荣昌402460 Department of Wildlife and Fisheries Sciences and Faculty of NutritionTexas A&M University SystemCollege StationTexas 77840-2258USA 四川农业大学动物医学院成都625014 

出 版 物：《淡水渔业》 (Freshwater Fisheries)

年 卷 期：2015年第45卷第5期

页      面：3-10,28页

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：中央高校基本科研业务费(XDJK2014C056) 中国长江三峡集团公司科研项目(CT-12-08-01) 

主　　题：嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila) omp A 亚单位疫苗 斑点叉尾(Ictalurus punctatus) 免疫效果 

摘      要：为评价嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)PDK06株外膜蛋白A(omp A)的原核表达产物是否具有抗原性及其对斑点叉尾(Ictalurus punctatus)的免疫保护力,根据Gen Bank上嗜水气单胞菌外膜蛋白omp A基因序列(Gen Bank登录号:AF146597)设计去信号肽引物,扩增获得一段约1 000 bp的序列,经鉴定正确后,构建重组表达质粒p ET-32a(+)-pomp A;然后将该质粒转入BL21(DE3)后用IPTG诱导表达,经纯化后得到pomp A重组蛋白;最后将pomp Aomp A蛋白与弗氏不完全佐剂(FIA)混合免疫斑点叉尾,评价其免疫效果。结果显示:克隆的嗜水气单胞菌pomp A基因全长为960 bp,编码319个氨基酸,融合表达的重组蛋白相对分子质量约为53,670 k Da;FIA能够提高斑点叉尾的溶菌酶活性、ACH50活性、头肾巨噬细胞呼吸暴发活性;pomp A组抗体水平在第4周达到峰值,FIA免疫组抗体水平在第5周达到峰值,且FIA能够显著提高斑点叉尾的抗体水平;攻毒后各组累计死亡率分别为93.33%(PBS)、93.33%(FIA)、50.00%(pomp A)和13.33%(FIA+pomp A),pomp A和FIA+pomp A组相对保护率分别为46.43%和85.71%;免疫组靶器官中的细菌数量显著低于对照组,且FIA+pomp A细菌含量最低。说明pomp A可以作为一个亚单位疫苗候选疫苗,而FIA佐剂能较好的增强亚单位疫苗的免疫效果。