牛凝乳酶原基因在毕赤酵母中的表达及其酶学特性的研究

作     者：杨艺 普燕 张富春 YANG Yi;PU Yan;ZHANG FU-chun

作者机构：新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源与基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046 

出 版 物：《食品工业科技》 (Science and Technology of Food Industry)

年 卷 期：2014年第35卷第15期

页      面：188-192页

核心收录：

学科分类：08[工学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：新疆自治区动物学重点学科-乳品工程资助(2011001) 

主　　题：牛凝乳酶 毕赤酵母 分泌表达 酶学特性 金属离子 

摘      要：凝乳酶是制造干酪的关键酶。为获得高活性的牛凝乳酶（chymosin，B—chy），用电脉冲法将线性化的pGAPZctA—B—pchy重组表达载体转化到毕赤酵母GS115中。该菌株在以葡萄糖为碳源的YPD培养基中可分泌表达牛凝乳酶原。SDS—PAGE分析表明所表达的牛凝乳酶，分子量约为37ku，符合预期大小。发酵培养96h后，酶活力达到96SU／mL。酶学特性分析表明，其最适凝乳温度为60℃，在pH2～6、小于50℃的温度范围内稳定。Ca2＋浓度为40mmol／L时，钙促酶反应活性达到最高，此后随着Ca2＋浓度的增加酶活力逐渐降低。金属离子Al3＋、Mn2＋、Fe2＋、Mg2＋和K＋对酶活力具有显著的促进作用，而Co2＋、Zn2＋、Cu2＋、Ni＋对酶活力具有显著的抑制作用。本研究优化了凝乳酶的表达条件，为凝乳酶工业化生产提供了理论基础。