中药化学成分抗糠秕马拉色菌活性筛选及协同抗菌作用

作     者：黄燕 韦志英 张怡婕 李耀华 农清栋 黄冬梅 潘小姣 HUANG Yan;WEI Zhiying;ZHANG Yijie;LI Yaohua;NONG Qingdong;HUANG Dongmei;PAN Xiaojiao

作者机构：广西中医药大学广西南宁530200 广西中医药大学附属瑞康医院广西南宁530011 

出 版 物：《中国皮肤性病学杂志》 (The Chinese Journal of Dermatovenereology)

年 卷 期：2024年第38卷第7期

页      面：731-739页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：广西中医药管理局科研课题(GXZYA20220102) 广西中医药大学科研课题(2021MS009) 

主　　题：糠秕马拉色菌 肉桂酸 盐酸小檗碱 协同抗菌作用 真菌生物膜 

摘      要：目的从30种常见非挥发性中药化学成分中筛选出对糠秕马拉色菌(Malassezia furfur,MF)抑制活性最强的两种化学成分,并对两者的协同抗菌作用及作用机制进行探究。方法采用管碟琼脂扩散法对30种中药单体化合物的MF抑制活性进行初筛;采用96孔板培养联合固体培养基接种法,测定活性最强两种单体化合物、酮康唑(KTZ)及吡啶硫酮锌(ZPT)的最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC)及其联合应用之后的联合最低杀菌浓度(combined minimum bactericidal concentration,CMBC),并计算联合杀菌指数(fractional bactericidal concentration index,FBCI);采用结晶紫法测定活性成分对MF生物膜的影响;扫描电镜观察活性成分对MF外观形态的影响;CCK-8法检测活性成分对人永生角质形成细胞(HaCaT)的细胞毒性。结果对MF抑制活性最强的两种化学成分分别为肉桂酸(CIN)和盐酸小檗碱(BER),在作用浓度为5.00 mg/mL时,两者抑菌圈直径分别为(15.17±2.37)mm和(11.21±1.03)mm。各样品的MBC大小顺序为:BER(2500.00μg/mL)CIN(156.25μg/mL)ZPT(62.50μg/mL)KTZ(7.81μg/mL)。FBCI试验结果表明:CIN和BER配伍,或者两者分别与KTZ或ZPT配伍,均具有协同杀菌的作用;CIN、BER、KTZ及ZPT相互配伍的CMBC分别为39.06、625.00、1.95、15.62μg/mL,FBCI均为0.5。各样品对MF生物膜抑制率的大小顺序为:CIN(93.08±1.15)%KTZ(65.10±4.23)%ZPT(43.00±2.81)%BER(10.55±1.21)%。扫描电镜结果显示,CIN组MF细胞结构完整,但是大部分菌体细胞壁出现不同程度的凹陷;BER、KTZ及ZPT组MF细胞结构完整,但是大部分菌体整体皱缩,细胞壁表面凹凸不平、粗糙。各样品对HaCaT细胞毒性的大小顺序为:ZPT(IC 50BER[IC 50=(27.83±0.66)μg/mL]KTZ[IC 50=(28.22±0.14)μg/mL]CIN(IC 50200.00μg/mL)。结论CIN和BER具有协同抗MF的作用,它们分别与ZPT或KTZ联合应用也有协同抗MF作用;CIN的抗菌作用机制可能与抑制生物膜相关;两者均具有应用于祛头皮屑外用药品或日化产品中的潜质。