气道上皮细胞Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1基因敲除对慢性阻塞性肺疾病肺气肿表型的影响

作     者：徐双兰 陈子 杨姣 樊则琴 刘婷 张新婷 曾冰倩 邢西迁 Xu Shuanglan;Chen Zi;Yang Jiao;Fan Zeqin;Liu Ting;Zhang Xinting;Zeng Bingqian;Xing Xiqian

作者机构：云南大学附属医院呼吸与危重症医学科云南省教育厅呼吸疾病研究重点实验室昆明650021 南京医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学科南京210029 昆明医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学科昆明650032 

出 版 物：《中华结核和呼吸杂志》 (Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases)

年 卷 期：2024年第47卷第4期

页      面：339-345页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82160016,82000038) 云南省高层次人才培养支持计划“名医”专项(YNWR-MY-2020-013) 云南省呼吸与肺循环疾病创新团队(202405AS350018) 云南省教育厅科学研究基金项目(2024J0016) 

主　　题：肺疾病,慢性阻塞性 肺气肿 SHP-1 气道上皮细胞 基因敲除 

摘      要：目的构建并鉴定气道上皮细胞条件性Src同源区2蛋白酪氨酸磷酸酶1(SHP-1)基因敲除小鼠,观察慢性阻塞性肺疾病(慢阻肺)患者气道上皮SHP-1表达情况及SHP-1表达缺陷对肺气肿小鼠表型的影响。方法检测慢阻肺患者肺组织中气道上皮SHP-1的表达情况。采用CRISPR/Cas9技术构建SHP-1^(flox/flox)转基因小鼠,并将其与气道上皮细胞Clara蛋白10-环化重组酶与雌激素受体融合转基因小鼠(CC10-CreER^(+/+))进行交配,腹腔注射他莫昔芬后,获得气道上皮SHP-1基因敲除小鼠(SHP-1^(flox/flox)CC10-CreER^(+/-),SHP-1^(Δ/Δ))。提取小鼠鼠尾和肺组织DNA,经PCR扩增后判别小鼠的基因型;通过qRT-PCR、Western blot、免疫荧光等方法验证气道上皮细胞SHP-1基因的敲除效果。使用弹性蛋白酶构建肺气肿小鼠模型,评估各组小鼠肺气肿严重程度。结果慢阻肺患者气道上皮SHP-1表达显著下调。基因型鉴定证实SHP-1^(Δ/Δ)小鼠表达CC10-CreER及SHP-1-flox。他莫昔芬诱导后,我们从DNA、RNA及蛋白水平证明SHP-1^(Δ/Δ)小鼠气道上皮细胞中SHP-1蛋白表达缺失,表明气道上皮细胞特异性SHP-1基因敲除小鼠构建成功。肺气肿动物模型中,SHP-1^(Δ/Δ)小鼠与对照组相比,肺气肿表型更为严重,表现为肺组织肺泡结构紊乱,肺泡壁破裂融合形成肺大疱。结论本研究成功建立并鉴定气道上皮细胞SHP-1基因敲除小鼠模型,为深入阐明SHP-1在慢阻肺进程中的作用及其机制提供了新的实验工具。