表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的嵌合狂犬病病毒生物学特性

作     者：李欣 李伊铭 赵洪哲 王亚新 王凤雪 温永俊 LI Xin;LI Yiming;ZHAO Hongzhe;WANG Yaxin;WANG Fengxue;WEN Yongjun

作者机构：内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第43卷第12期

页      面：2451-2456页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：内蒙古农业大学高层次人才引进资助项目(NDYB2018-2,NDGCC2016-22) 内蒙古自治区自然科学基金资助项目(2020MS03047)。 

主　　题：BVDV E2蛋白 RV疫苗毒株 LBNSE 反向遗传操作 直接免疫荧光 

摘      要：牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起牛发热、腹泻、黏膜糜烂溃疡等症状,给养牛业带来严重经济损失,新型疫苗的研发意义重大。狂犬病病毒(rabies virus,RV)作为病毒载体可稳定表达外源蛋白,反过来外源蛋白也不会阻碍病毒的复制。本研究目的是利用反向遗传操作技术构建和拯救表达BVDV结构蛋白的重组RV,以期获得一种能表达高水平BVDV E2蛋白的重组病毒。选择Ⅰ型BVDV主要优势抗原E2蛋白基因序列进行优化后合成E2基因片段,利用Overlap PCR的方法将E2基因改造为DE2片段,以RV疫苗毒株LBNSE为病毒载体,利用BsiWⅠ和NheⅠ酶切位点,将DE2基因插入LBNSE基因组中,成功构建pRV-DE2重组质粒。脂质体法将全长重组质粒转染BSR细胞后,拯救重组病毒RV-DE2,并用直接免疫荧光和RT-PCR的方法对其鉴定,对构建成功的病毒进行生长特性、致病性、重组蛋白表达特性等生物学特性和小鼠体内免疫效力的研究。结果表明,RV-DE2病毒滴度在F3代之后趋于稳定,在相同的培养条件下比亲本LBNSE病毒滴度高。重组病毒对小鼠无致死性,E2蛋白表达量高于BVDV。将灭活的重组病毒免疫小鼠后成功产生了抗BVDV的中和抗体。表达BVDV E2的重组RV的成功拯救为BVDV新型疫苗的研发提供候选毒株,对BVD的防控提供了一种新的思路。