托高土病毒核蛋白的异源表达、纯化与结晶

作     者：马林 鞠金鑫 李琳 秦晓春 董士尚 

作者机构：济南大学生物科学与技术学院 

出 版 物：《济南大学学报(自然科学版)》 (Journal of University of Jinan(Science and Technology))

年 卷 期：2024年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：山东省自然科学基金项目(ZR2020QC057) 泰山学者青年专家计划项目(tsqn201812079) 

主　　题：托高土病毒 核蛋白 分离 纯化 结晶 

摘      要：为了获得托高土病毒核蛋白氮端结构域的蛋白(THOV NPN)晶体，进一步探究其结构和功能，依次采用镍亲和层析、肝素亲和层析方法，对大肠杆菌异源表达获得的THOV NPN进行纯化；利用凝胶过滤层析及十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对THOV NPN的均一性和纯度进行检测；分别使用坐滴法和悬滴法对THOV NPN进行结晶条件的筛选和优化，结合质谱法对所得的晶体进行验证。结果表明：所使用的提取方法可以获得纯度较高、性质均一的THOV NPN；在培养温度16 ℃，THOV NPN的质量浓度为25.0 g/L，池液中磷酸氢二铵、柠檬酸钠、氯化钠的浓度分别为0.8、0.1、0.2 mol/L及pH= 5.0的条件下可以获得粒径为0.05 mm、形状近似正方体的THOV NPN晶体。