CTB-FimA融合蛋白原核表达纯化及其免疫效果

作     者：梁梦歌 李智涛 韩海芳 王烁 陈义祥 高社干 LIANG Mengge;LI Zhitao;HAN Haifang;WANG Shuo;CHEN Yixiang;GAO Shegan

作者机构：河南科技大学基础医学与法医学院河南洛阳471003 河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院河南科技大学肿瘤研究所河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南洛阳471003 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2024年第34卷第1期

页      面：12-19页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81972571) 洛阳市社会发展专项医疗卫生重点项目(2101038A) 

主　　题：牙龈卟啉单胞菌 CTB-FimA重组蛋白 诱导表达 亲和层析 凝胶过滤层析 鼻腔黏膜免疫 

摘      要：[目的]构建牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌毛蛋白(FimA)与霍乱毒素B亚基(CTB)重组质粒pET-32a/CTB-FimA,表达纯化CTB-FimA融合蛋白并对其黏膜免疫效果进行研究。[方法]根据GenBank查找FimA基因和CTB基因,利用(Gly4Ser)3连接肽序列构建pET-32a/CTB-FimA原核表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),确定IPTG诱导浓度及温度,SDS-PAGE分析目的蛋白的可溶性;采用亲和层析和凝胶过滤层析纯化目的蛋白CTB-FimA;用纯化的目的蛋白作为免疫原鼻腔滴注免疫BALB/c小鼠观察其黏膜免疫效果。[结果]经双酶切和测序鉴定pET-32a/CTB-FimA重组表达质粒构建成功;IPTG最适诱导浓度为0.5 mmol/L,最适诱导温度为23℃,重组蛋白CTB-FimA主要以可溶形式表达;Expasy软件ProtParam工具预测重组蛋白分子量约为72.08 kDa,亲水性总平均值为-0.313;每升发酵液表达CTB-FimA蛋白约100 mg;免疫BALB/c小鼠产生sIgA抗体效价显著高于对照组。[结论]成功构建pET-32a/CTB-FimA重组蛋白表达质粒,获得可溶性CTB-FimA重组蛋白,鼻腔滴注免疫BALB/c小鼠能够产生高效价的sIgA抗体,为防治口腔牙龈卟啉单胞菌感染疫苗的研制奠定基础。