胃癌上皮-间充质转化过程中微小RNA-579-3p/含锌指和BTB域4通路的作用及其机制

作     者：刘文博 王冰雨 李勇 李英杰 翟建宁 孔凡铭 孙楠 檀碧波 Liu Wenbo;Wang Bingyu;Li Yong;Li Yingjie;Zhai Jianning;Kong Fanming;Sun Nan;Tan Bibo

作者机构：河北医科大学第四医院外三科石家庄050011 北京大学肿瘤医院胃肠肿瘤中心三病区北京100142 天津中医药大学第一附属医院肿瘤科天津300193 河北医科大学第四医院输血科石家庄050011 河北省胃癌精准诊断与综合治疗重点实验室石家庄050011 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2024年第41卷第2期

页      面：235-238页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：胃癌 微小RNA 上皮-间充质转化 生物信息学 

摘      要：目的探讨微小RNA-579-3p(miR-579-3p)/含锌指和BTB域4(ZBTB4)通路在胃癌上皮-间充质转化(EMT)中的作用机制。方法生物信息学筛选胃癌与癌旁组织差异表达的微小RNA(miRNA);实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测50例患者胃癌和癌旁癌旁组织中miR-579-3p、ZBTB4表达;检测胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株HGC27、AGS、MKN45中miR-579-3p的表达, 分析miR-579-3p与临床病理特征的关系。生物信息学分析miR-579-3p靶基因。双荧光素酶报告基因验证miR-579-3p与ZBTB4的调控关系。应用miR-579-3p抑制物(inhibitor)干扰HGC27细胞株miR-579-3p表达, 细胞计数试剂盒(CCK-8)法、划痕实验、Transwell小室实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测mRNA和蛋白表达水平。采用t检验、χ^(2)检验分析数据。结果生物信息学筛选后RT-qPCR检测结果发现miR-579-3p在胃癌组织中表达显著高于癌旁组织(3.259±1.307比1.326±0.419, t=9.959, P0.01), miR-579-3p表达与胃癌分化和淋巴结转移明显相关(χ^(2)=4.500、7.714, P0.05);miR-579-3p在胃癌细胞株表达均高于GES-1(P0.01)。转染miR-579-3p抑制剂的HGC-27细胞活性(0.500±0.068比1.223±0.089, t=15.780, P0.01)、迁移率(0.228±0.039比0.533±0.056, t=7.707, P0.01)和侵袭细胞数[(89.000±7.550)个比(206.700±8.505)个, t=17.92, P0.01]显著低于对照组。RT-qPCR结果显示miR-579-3p inhibitors组波形蛋白(Vimentin)(0.248±0.030比1.061±0.150, t=9.258, P0.01)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)(0.178±0.030比1.013±0.195, t=3.320, P0.01)和连接蛋白细胞黏附分子(Nectin-4)(0.465±0.065比1.042±0.154, t=5.990, P0.01)的mRNA表达明显低于对照组, 而E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA(3.249±0.460比1.000±0.175, t=7.990, P0.01)的表达明显高于对照组, Western blot检测显示抑制miR-579-3p表达后Vimentin(0.420±0.271比1.004±0.095, t=3.528, P0.05)、MMP-2(0.663±0.119比0.922±0.068, t=3.283, P0.05)、Nectin-4表达(0.660±0.130比0.919±0.080, t=2.982, P0.05)低于对照组, 而E-cadherin蛋白表达(1.352±0.113比0.994±0.005, t=5.483, P0.01)高于对照组。生信分析结果显示ZBTB4是miR-579-3p靶基因;双荧光素酶报告基因分析表明过表达miR-579-3p后野生组中ZBTB4基因活性明显低于对照组(0.323±0.020比1.095±0.131, t=11.690, P0.01)。RT-qPCR显示ZBTB4在胃癌组织中表达低于癌旁组织(t=7.713, P0.01);皮尔逊相关分析结果显示ZBTB4与miR-579-3p呈负相关(r=-0.470, P0.01)。RT-qPCR和Western blot显示抑制miR-579-3p后ZBTB4表达明显增强(P0.01)。结论 miR-579-3p/ZBTB4通路激活促进胃癌的EMT。