银杏双黄酮通过调控细胞周期对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制

作     者：郭志远 王凯 李燕彬 张明凯 李文 黄海 于方璞 刘畅 李玉明 Guo Zhiyuan;Wang Kai;Li Yanbin;Zhang Mingkai;Li Wen;Huang Hai;Yu Fangpu;Liu Chang;Li Yuming

作者机构：滨州医学院附属医院胃肠外科滨州256600 滨州医学院附属医院结直肠肛门外科滨州256600 滨州市人民医院临床营养科滨州256600 滨州医学院附属医院烧伤整形外科滨州256600 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2024年第41卷第2期

页      面：214-217页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：山东省自然科学基金面上项目(ZR2019MH080) 滨州医学院校级课题(BY2022KJ17) 

主　　题：胃癌 银杏双黄酮 细胞周期 细胞凋亡 

摘      要：目的探讨银杏双黄酮通过调控细胞周期对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人胃癌MKN-45细胞;银杏双黄酮溶于二甲基亚砜(DMSO)中, 使用MKN-45专用培养基配制系列浓度的银杏双黄酮溶液, 分为0 μm(含1‰浓度的DMSO)组、12.5 μm组、25.0 μm组、50.0 μm组、100.0 μm组, 分别处理胃癌MKN-45细胞48 h, 使用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证细胞的增殖能力, 并确定半数抑制浓度, 以供后续实验使用;在培养的胃癌细胞MKN-45中分别加入1‰DMSO、浓度50.0 μm的银杏双黄酮及c-myc抑制剂处理48 h, 分为空白对照(NC)组、银杏双黄酮组及银杏双黄酮+c-myc抑制剂组, 使用流式细胞术验证银杏双黄酮对胃癌细胞的凋亡及细胞周期的影响, 蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路下游关键基因c-myc、凋亡相关指标B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)及细胞周期相关指标周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白B1(CCNB1)的表达水平。各组间比较比较采用t检验。结果 CCK-8结果显示12.5 μm组细胞生存率低于0 μm组[(83.75±1.16)%比(102.26±3.08)%, t=10.83, P0.01];25.0 μm组细胞生存率生存率低于0 μm组[(75.60±1.64)%比(102.26±3.08)%, t=12.68, P0.01];50.0 μm组细胞生存率明显低于0 μm组[(53.29±1.33)%比(102.26±3.08)%, t=30.36, P0.01];100.0 μm组细胞生存率明显低于0 μm组[(25.41±1.02)%比(102.26±3.08)%, t=47.66, P0.01], 测得48 h时胃癌MKN-45细胞半数抑制浓度(IC50)值为51.39;流式细胞术实验结果显示银杏双黄酮可诱导胃癌MKN-45细胞凋亡(凋亡率由12.36%上升到49.60%), 并导致胃癌细胞G2期阻滞(G2/M期的细胞数量从1.85%上升到27.00%);Western blot实验结果显示, 银杏双黄酮组bax蛋白水平表达高于NC组(571 241±7 627比364 248±351, t=71.72, P0.01);银杏双黄酮组bcl-2蛋白水平低于NC组(604 069±7 597比681 315±7 017, t=19.76, P0.01);银杏双黄酮组CDK2蛋白水平表达低于NC组(627 653±9 488比742 450±5 791, t=27.32, P0.01);银杏双黄酮组cyclinb1蛋白水平表达低于NC组(558 302±11 687比708 767±20 598, t=16.81, P0.01);银杏双黄酮组WNT信号通路下游基因c-myc蛋白水平表达量低于对照组(643 589±6 304比836 895±6 428, t=56.80, P0.01);银杏双黄酮+c-myc抑制剂组c-myc蛋白水平表达量低于银杏双黄酮组(504 992±6 779比643 589±6 304, t=39.61, P0.01)。结论银杏双黄酮通过调控Wnt信号通路, 降低胃癌细胞中c-myc的表达来调控细胞周期, 从而影响胃癌的增殖与凋亡能力。