circ_100284/miR-217/MAPK1调控食管鳞状细胞癌侵袭及其对5-FU化疗敏感性的影响
作者机构:平顶山市医学院第一附属医院/平顶山市第一人民医院消化内科 郑州大学第一附属医院胸外科
出 版 物:《解放军医学杂志》 (Medical Journal of Chinese People's Liberation Army)
年 卷 期:2024年
核心收录:
学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
主 题:circ_100284 miR-217 MAPK1 食管癌 化疗敏感性
摘 要:目的 探究环状RNA(circ_100284)作为竞争性內源RNA(ceRNA)通过调控微小RNA-217(miR-217)/丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)调控食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭及其对5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响。方法 生物信息学分析ESCC中差异表达的circRNAs。qRT-PCR检测ESCC组织和细胞中circ_100284的表达。使用浓度逐渐增加的5-FU处理KYSE450以建立5-FU耐药KYSE450细胞系(KYSE45-R),MTT实验检测KYSE450和KYSE450-R细胞的IC50。qRT-PCR检测KYSE450和KYSE450-R细胞中circ_100284、miR-217和MAPK1 mRNA的表达,Western blotting检测MAPK1蛋白的表达。取KYSE450-R细胞,设置:(1)空白对照组(不做处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-circ_100284组(转染si-circ_100284)、pc-Control组(转染pc-Control)、pc-circ_100284组(转染pc-circ_100284)、pc-circ_100284+mimic NC组(转染pc-circ_100284和mimic NC)、pc-circ_100284+miR-217 mimic组(转染pc-circ_100284和miR-217 mimic),采用MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。(2)空白对照组(不做处理)、si-NC组(转染si-MAPK1的阴性对照)、si-MAPK1组(转染si-MAPK1)、si-MAPK1+inhibitor NC组(转染si-MAPK1和inhibitor NC)、si-MAPK1+miR-217 inhibitor组(转染si-MAPK1和miR-217 inhibitor),采用qRT-PCR和Western blotting检测MAPK1 mRNA和蛋白的表达,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。将circ_100284-WT或circ_100284-MUT报告质粒、MAPK1-WT或MAPK1-MUT报告质粒分别与miR-NC或miR-217 mimic共转染KYSE450-R细胞48 h,使用双荧光素酶报告实验测定相对荧光素酶活性。结果 生物信息学分析显示circ_100284在ESCC中呈高表达。与癌旁正常组织比较,ESCC组织中circ_100284表达明显增加(P0.05);与HECC细胞比较,ESCC各细胞系中circ_100284表达明显增加(P0.05)。与KYSE450细胞比较,KYSE450-R细胞的IC50增加,circ_100284、MAPK1表达增加但miR-217表达被抑制(P0.05)。与si-NC组比较,si-circ_100284组细胞活力被抑制,细胞侵袭数减少,细胞凋亡率增高(P0.05)。与pc-Control组比较,pc-circ_100284组细胞活力和细胞侵袭数增加,细胞凋亡率降低(P0.05),而pc-circ_100284对ESCC细胞恶性生物学行为的影响被miR-217过表达逆转(P0.05)。与si-NC组比较,si-MAPK1组细胞活力被抑制,细胞侵袭数减少,细胞凋亡率增高(P0.05),而si-MAPK1对ESCC细胞生物学行为的影响被miR-217 inhibitor逆转(P0.05)。circ_100284与miR-217、miR-217与MAPK1具有靶向关系。结论 circ_100284通过调控miR-217/MAPK1进而促进ESCC细胞侵袭,抑制ESCC细胞对5-FU的化疗敏感性,在ESCC中发挥促癌因子的作用。