低剂量氯胺酮通过小胶质细胞NF-κB/iNOS通路减轻小鼠颅脑创伤后的微循环障碍

作     者：张国栋 何锋 李远超 赵岗 张家旗 郭锋杰 程振国 Zhang Guodong;He Feng;Li Yuanchao;Zhao Gang;Zhang Jiaqi;Guo Fengjie;Cheng Zhenguo

作者机构：新乡市中心医院神经外科新乡453000 

出 版 物：《中华神经医学杂志》 (Chinese Journal of Neuromedicine)

年 卷 期：2024年第23卷第1期

页      面：10-17页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：河南省医学科技攻关计划联合共建项目(LHGJ20200953) 

主　　题：颅脑创伤 氯胺酮 小胶质细胞 微循环 神经炎症 

摘      要：目的:探讨低剂量氯胺酮对颅脑创伤(TBI)小鼠神经炎症和微循环的影响。方法:采用随机数字表法将60只成年雄性C57BL/6小鼠分成假手术组、TBI组、假手术+氯胺酮组和TBI+氯胺酮组,每组15只;后2组小鼠采用控制性皮质撞击法(CCI)建立开放性TBI模型。假手术+氯胺酮组和TBI+氯胺酮组于造模后30 min腹腔注射氯胺酮30 mg/kg,1次/d,连续3 d。假手术组和TBI组分别于相同时间点经腹腔注射等量生理盐水。每组取6只小鼠分别于造模前、造模后即刻、造模后30 min、造模后1 d及造模后3 d利用激光散斑对比血流成像(LSCI)技术测量脑皮层血流量。另取6只小鼠于造模后第3天经心脏灌注取材行免疫组织化学染色和免疫荧光双标染色,检测小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白抗体-1(Iba-1)及核因子(NF)-κB p65核转位情况。剩余每组3只小鼠于造模后第3天处死后制成组织原浆,通过Western blotting实验检测皮质脑组织NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκB及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白水平,通过ELISA法检测皮层脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、iNOS、氧自由基(ROS)、氮自由基(RNS)表达水平。结果:LSCI检测结果显示,造模后3 d,与TBI组比较,TBI+氯胺酮组小鼠脑局部微循环相对血流量明显增加,差异有统计学意义( P0.05)。免疫组织化学染色结果显示,与假手术组及假手术+氯胺酮组比较,TBI组、TBI+氯胺酮组小鼠脑皮质区域内Iba-1阳性细胞数明显增加,差异有统计学意义( P0.05);与TBI组比较,TBI+氯胺酮组小鼠Iba-1阳性细胞数明显下降,差异有统计学意义( P0.05)。ELISA法检测结果显示,与假手术组及假手术+氯胺酮组比较,TBI组、TBI+氯胺酮组小鼠损伤皮质脑组织中炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6、iNOS及自由基ROS和RNS表达水平均明显升高,差异有统计学意义( P0.05);与TBI组比较,TBI+氯胺酮组小鼠损伤皮质脑组织中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS及自由基ROS和RNS表达水平均明显下降,差异均有统计学意义( P0.05)。免疫荧光双染结果显示,与TBI组比较,TBI+氯胺酮组小鼠NF-κB p65核转位明显受到抑制。Western blotting实验结果显示,与假手术组及假手术+氯胺酮组比较,TBI组和TBI+氯胺酮组小鼠损伤皮质脑组织中iNOS、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκB蛋白表达水平均明显升高,差异均有统计学意义( P0.05);与TBI组比较,TBI+氯胺酮组小鼠损伤皮质脑组织中iNOS、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκB蛋白表达水平均明显降低,差异均有统计学意义( P0.05)。 结论:低剂量氯胺酮可减轻开放性TBI后神经炎症,改善脑微循环血流,其作用机制可能与抑制小胶质细胞NF-κB/iNOS通路有关。