miR-455-3p调控sirt1表达对大鼠椎间盘髓核细胞增殖及凋亡的影响

作     者：唐家国 李晨芳 左斌 何精选 夏晓枫 王鹏 邹凯 娄文杰 TANG Jia-guo;LI Chen-fang;ZUO Bin;HE Jing-xuan;XIA Xiao-feng;WANG Peng;ZOU Kai;LOU Wen-jie

作者机构：长江航运总医院·武汉脑科医院骨外科湖北武汉430000 长江航运总医院·武汉脑科医院老年科湖北武汉430000 

出 版 物：《颈腰痛杂志》 (The Journal of Cervicodynia and Lumbodynia)

年 卷 期：2024年第45卷第1期

页      面：1-8,13页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：湖北省卫生健康科研基金资助项目(编号:WJ2019H388) 武汉市卫生健康科研基金资助项目(编号:WX19Q41) 

主　　题：miR-455-3p 沉默信息调节因子2同源蛋白1 大鼠 椎间盘髓核细胞 增殖 凋亡 

摘      要：目的探讨miR-455-3p调控沉默信息调节因子2同源蛋白1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,sirt1)表达对大鼠椎间盘髓核(nucleus pulposus,NP)细胞增殖及凋亡的影响。方法采用Ⅱ型胶原酶从大鼠腰椎椎间盘中分离NP细胞,并用甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)免疫荧光染色对其鉴定。NP细胞分成Ctrl组、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)组、IL-1β+NC inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-NC组、IL-1β+miR-455-3p inhibitor+si-sirt1组,除Ctrl组外的五组细胞均使用10 ng/mL的IL-1β诱导NP细胞退变模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miR-455-3p及sirt1 mRNA水平;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测增殖;JC-1染色检测线粒体膜电位;Hoechst染色检测凋亡;蛋白免疫印迹检测sirt1、增殖(PCNA、Ki67、Cyclin D1)和凋亡(Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase 3)相关蛋白及CollagenⅡ、Aggrecan表达;双荧光素酶报告分析实验验证miR-455-3p与sirt1的靶向关系。结果大鼠椎间盘NP细胞被成功分离。与IL-1β组、IL-1β+NC inhibitor组比较,IL-1β+miR-455-3p inhibitor组miR-455-3p表达、凋亡率、Bax、Cleaved-caspase 3表达及Bax/Bcl-2比值下降,细胞活力、PCNA、Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、CollagenⅡ、Aggrecan表达升高(P0.05)。miR-455-3p直接靶向负调控sirt1表达。干扰sirt1可逆转抑制miR-455-3p表达对NP细胞增殖、凋亡的影响。结论抑制miR-455-3p表达可通过靶向调控sirt1,抑制IL-1β诱导的NP细胞凋亡并促进NP细胞增殖。