M1型巨噬细胞来源的外泌体微小RNA-16-5p对心房肌细胞电生理的影响

作     者：程燕妮 王学文 曹真 付韫韬 柯元甲 郭珂欣 李雅佳 龙晓建 赵庆彦 Cheng Yanni;Wang Xuewen;Cao Zhen;Fu Yuntao;Ke Yuanjia;Guo Kexin;Li Yajia;Long Xiaojian;Zhao Qingyan

作者机构：武汉大学人民医院心血管内科、武汉大学心血管病研究所、心血管病湖北省重点实验室武汉430060 

出 版 物：《临床内科杂志》 (Journal of Clinical Internal Medicine)

年 卷 期：2024年第41卷第1期

页      面：51-55页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(82170312) 

主　　题：心房颤动 巨噬细胞 外泌体 动作电位 电重构 

摘      要：目的 探讨M1型巨噬细胞来源的外泌体微小RNA(miR)-16-5p对心房肌细胞电生理的影响及可能机制。方法 将小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)分为脂多糖(LPS)组(LPS诱导刺激RAW264.7细胞24 h使其分化为M1型巨噬细胞)、miR-16-5p阴性对照(NC)组(将miR-16-5p NC转染RAW264.7细胞后诱导分化)、miR-16-5p模拟物(mimics)组(将miR-16-5p mimics转染RAW264.7细胞后诱导分化)、miR-16-5p抑制物(inhibitor)组(将miR-16-5p inhibitor转染RAW264.7细胞后诱导分化)及LPS+中性鞘磷脂酶抑制剂(GW4869)组(RAW264.7细胞经LPS诱导完成后加入10μM GW4869继续培养)。5组巨噬细胞培养48~72 h后收集上清液,采用超速离心法提取外泌体。采用实时荧光PCR(qRT-PCR)检测转染后巨噬细胞miR-16-5p相对表达水平。将心房肌细胞(HL-1细胞)暴露于快速电刺激(1.0 V/cm, 10 Hz)48 h构建快速起搏诱导的房颤细胞模型,与各组外泌体共培养,心房肌细胞分为A组(起搏HL-1细胞+LPS组外泌体)、B组(起搏HL-1细胞+miR-16-5p NC组外泌体)、C组(起搏HL-1细胞+miR-16-5p mimics组外泌体)、D组(起搏HL-1细胞+miR-16-5p inhibitor组外泌体)、E组(起搏HL-1细胞+LPS+GW4869组外泌体)。采用膜片钳检测各组心房肌细胞动作电位时限[复极化达50%和90%的动作电位时限(APD50、APD90)],采用蛋白质免疫印记法检测5组细胞中磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)表达水平。结果 miR-16-5p mimics组巨噬细胞miR-16-5p相对表达水平高于miR-16-5p NC组(P0.05);C组HL-1细胞APD50和APD90均短于A组(P0.05);C组HL-1细胞PI3K表达水平、p-AKT/AKT均低于A组(P0.001);D组及E组HL-1细胞PI3K表达水平、p-AKT/AKT均高于A组(P0.001)。结论 M1型巨噬细胞来源的外泌体miR-16-5p可缩短心房肌细胞动作电位时限,可能与抑制PI3K/AKT通路有关。