恶性胸膜间皮瘤细胞培养条件及CDKN2B对癌细胞的作用

作     者：尹小川 尹瑞扬 李冉华 蔡方奇 崔岳 毕涛 童兴和 YIN Xiaochuan;YIN Ruiyang;LI Ranhua;CAI Fangqi;CUI Yue;BI Tao;TONG Xinghe

作者机构：昆明医科大学第一附属医院胸外科云南昆明650032 昆明医科大学海源学院第二临床医学系云南昆明651700 

出 版 物：《昆明医科大学学报》 (Journal of Kunming Medical University)

年 卷 期：2024年第45卷第1期

页      面：28-34页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金资助项目[2019FE001(-043)] 

主　　题：恶性胸膜间皮瘤 培养条件 RPMI-1640培养液 CDKN2B 增殖 侵袭 

摘      要：目的探讨不同培养条件(RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液)对人恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma,MPM)组织中分离的MPM细胞传代的影响以及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(cyclin dependent kinase inhibitor 2B,CDKN2B)对MPM细胞增殖、侵袭和凋亡的作用。方法从MPM组织中分离细胞分别用RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液培养。CCK-8检测细胞增殖,细胞核及染色体利用瑞氏-吉姆萨染色观察,免疫荧光实验检测MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1荧光强度。RT-qPCR和Western blot分别检测CDKN2B的mRNA和蛋白表达能力。Transwell检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果建立的MPM细胞在RPMI-1640、DMEM和DMEM/F12培养液中传至第10代仍具有较好的活力,且MPM标志物Calretinin、CD141、CK5、EMA和WT-1在细胞中均表达,MPM细胞在RPMI-1640培养液中活力较为稳定。CDKN2B在MPM细胞中低表达(P0.05),过表达CDKN2B显著抑制MPM细胞的增殖(P0.05)、侵袭(P0.05)和上皮间质转化(P0.01),促进细胞凋亡(P0.01)。结论建立的MPM细胞可在RPMI-1640培养液中稳定传代,CDKN2B可作为MPM诊断和治疗的潜在靶标。