贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附法分离纯化鉴定大鼠纤维环源干细胞

作     者：马东 陈祁青 赵继荣 黄军凯 杨云云 朱宝 赵宁 马同 Ma Dong;Chen Qiqing;Zhao Jirong;Huang Junkai;Yang Yunyun;Zhu Bao;Zhao Ning;Ma Tong

作者机构：甘肃中医药大学 甘肃省中医院 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2024年第28卷第31期

页      面：4980-4986页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：甘肃省自然科学基金项目(17JR5RA051),项目负责人:陈祁青 国家自然科学基金地区科学基金项目(81760877),项目负责人:赵继荣 甘肃省中医院博士启动基金项目(2018-1),项目负责人:陈祁青~~ 

主　　题：纤维环源干细胞 培养 纤维连接蛋白 差别黏附法 大鼠 

摘      要：背景：目前，细胞疗法治疗椎间盘退变多以骨髓间充质干细胞为主。但是，使用骨髓间充质干细胞作为纤维环再生的种子细胞存在修复部位形成异位骨化和畸胎瘤的危险。因此，寻找一种新的纤维环组织工程种子细胞对椎间盘退变的治疗将具有巨大的经济和社会意义。目的：通过贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附筛选法分离纯化大鼠纤维环源干细胞，观察纯化效果及细胞的生物学特性。方法：从SD大鼠椎间盘中获取纤维环组织，机械-酶消化法获取原代纤维环源干细胞，通过贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附法纯化纤维环源干细胞，在显微镜下观察细胞形态变化及增殖情况，应用细胞免疫荧光技术和q PCR技术检测干细胞表面标志物的表达，对筛选后的细胞进行多系诱导分化和特征性基因检测。结果与结论：(1)纯化后细胞生长良好，形态多以角形和星形多突起细胞为主，具有较好的增殖能力；(2)细胞膜表面抗原CD73、CD90、CD105呈阳性表达，CD45、CD34呈阴性表达；(3)经特定诱导后，细胞可以成功分化为成骨细胞、成软骨细胞及成脂细胞；(4)成骨诱导后Collagen-Ⅰ、Runx2、成软骨诱导后Collagen-Ⅱ、Sox-9和成脂诱导后PPAR-γ、LPL各特征性基因均在细胞中呈高表达，与诱导前比较，差异有显著性意义(P 0.05);(5)结果表明，贴壁法联合纤维连接蛋白差别黏附法能够有效筛选、纯化大鼠纤维环源干细胞，所得的细胞生物学性能良好，具有较好的增殖及多向分化潜能。