黑龙江林蛙ferritin H基因克隆及其在细菌侵染下的表达变化分析

作     者：刘依铭 许冬梅 刘思影 刘玉芬 刘鹏 赵文阁 陈辉 LIU Yi-Ming;XU Dong-Mei;LIU Si-Ying;LIU Yu-Fen;LIU Peng;ZHAO Wen-Ge;CHEN Hui

作者机构：哈尔滨师范大学生命科学与技术学院哈尔滨150025 

出 版 物：《动物学杂志》 (Chinese Journal of Zoology)

年 卷 期：2023年第58卷第6期

页      面：881-890页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：黑龙江省自然科学基金联合引导项目(No.LH2021C053) 

主　　题：铁蛋白基因 黑龙江林蛙 嗜水气单胞菌 基因克隆 细菌感染 

摘      要：铁蛋白广泛存在于生物体内,能够使细胞内的铁元素含量保持相对稳定且能参与机体免疫反应。近年来因细菌侵染,黑龙江林蛙(Rana amurensis)种群数量出现下降趋势,本研究探究铁蛋白基因在细菌感染的林蛙中的表达模式,期望可以为黑龙江林蛙抗细菌感染的机制研究提供参考。本研究首先采用PCR技术扩增黑龙江林蛙铁蛋白H亚基基因的编码区序列并对其进行生物信息学分析;再应用实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测黑龙江林蛙被嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)侵染后,铁蛋白H亚基基因在其肝、脾、肾、皮肤以及肌肉组织中的转录水平变化情况;最后采用免疫荧光检测技术,分析嗜水气单胞菌侵染后,黑龙江林蛙铁蛋白H亚基蛋白表达情况。结果表明,该基因编码区长度534 bp,编码177个氨基酸;对该基因氨基酸序列进行分析,其与欧洲林蛙(***)相应基因同源性最高,达到98.37%;RT-q PCR结果显示,铁蛋白H亚基基因在黑龙江林蛙组织中广泛存在,在嗜水气单胞菌侵染后,铁蛋白H亚基m RNA在黑龙江林蛙肝、脾、肾、皮肤以及肌肉组织中的表达均显著上调(P0.01)。免疫荧光检测结果发现,在感染嗜水气单胞菌后,铁蛋白H亚基蛋白在黑龙江林蛙肝和肌肉组织的胞质中均有不同程度表达。综上结果表明,黑龙江林蛙铁蛋白H亚基基因会通过上调表达来响应细菌性感染,由此推测该基因参与了黑龙江林蛙的细菌性免疫应答。