水痘-带状疱疹病毒RAA检测方法的建立及初步应用

作     者：刘昊泽 王瑞晨 张维嘉 姚晓慧 付士红 聂凯 李樊 殷启凯 何英 王环宇 扈瑞平 许松涛 Liu Haoze;Wang Ruichen;Zhang Weijia;Yao Xiaohui;Fu Shihong;Nie Kai;Li Fan;Yin Qikai;He Ying;Wang Huanyu;Hu Ruiping;Xu Songtao

作者机构：内蒙古医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室呼和浩特010110 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 

出 版 物：《中华实验和临床病毒学杂志》 (Chinese Journal of Experimental and Clinical Virology)

年 卷 期：2023年第37卷第6期

页      面：631-636页

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

主　　题：重组酶等温扩增 水痘-带状疱疹病毒 检测 

摘      要：目的建立水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)的重组酶等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)快速检测方法。方法通过全球共享数据库下载VZV全基因组序列进行比对分析,针对四个保守基因分别设计特异性引物与探针并筛选出最佳组合,通过引物与探针浓度梯度筛选出最佳反应体系,建立荧光型RAA检测方法。用VZV阳性质粒标准品与梯度稀释的临床样本评价方法的灵敏度,以最低检出极限浓度的阳性质粒标准品进行重复实验评价方法的重复性,以其他病毒核酸评价方法的特异性,同时用本方法和荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qPCR)对临床样本进行检测并对检测结果进行比较。结果本方法筛选出针对开放阅读框架(open reading frame,ORF)28基因的引物对F2/R2与探针P2为最佳组合;考虑到成本因素,最佳引物浓度为500 nmol/L,最佳探针浓度为280 nmol/L;最低检出极限为101拷贝/μL,最低可检测到Ct值为36.027的临床阳性样本;重复实验的检测结果一致;该方法与其他病毒核酸无交叉反应;临床阳性样本的检出率为93.33%,与qPCR检测结果几乎完全一致。结论本方法操作简便、灵敏度高、特异性强、对实验条件要求低、检测结果直观可视,在20 min内就能够检测出样本中的VZV核酸,是一种可以被临床检测考虑的VZV快速检测方法。