脾阴虚证大鼠模型中水通道蛋白及肠道菌群的变化分析

作     者：黄红侠 卢雪凤 周权 方红 邓夏夏 孙有智 赵益 HUANG Hongxia;LU Xuefeng;ZHOU Quan;FANG Hong;DENG Xiaxia;SUN Youzhi;ZHAO Yi

作者机构：江西中医药大学中医基础理论分化发展研究中心江西省中医病因生物学重点实验室方-证研究中心南昌330004 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2023年第29卷第23期

页      面：131-139页

核心收录：

学科分类：07[理学] 071005[理学-微生物学] 1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100705[医学-微生物与生化药学] 1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 100501[医学-中医基础理论] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81860777) 江西省重大科技研发专项(20203ABC28W019) 江西省中医药骨干人才培养项目(赣中医药科教字4号) 江西省“十四五”期间一流大学和一流学科建设项目(赣教研字1号) 江西中医药大学校级科技创新团队发展计划项目(CXTD22007) 江西中医药大学校级研究生创新专项(JZYC22S39) 

主　　题：脾阴虚证 血管活性肠肽(VIP) 水通道蛋白(AQP) 水液代谢 肠道菌群 相关性分析 聚合酶链式反应(PCR) 

摘      要：目的:以脾阴虚证模型大鼠为研究对象,探析脾阴虚对胃肠吸收、水液代谢及肠道菌群的影响。方法:采用荤素饮食不节、负重疲劳游泳和温热伤阴药灌胃复合因素建立脾阴虚证大鼠模型,观察空白组和模型组大鼠的体质量、进食量、饮水量、游泳持续时间的变化;苏木素-伊红(HE)染色观察胃和结肠组织病理损伤情况;间苯三酚法检测尿D-木糖排泄率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中胃泌素(GAS)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃组织中血管活性肠肽(VIP)、水通道蛋白3(AQP3)、AQP4的相对表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测胃组织中VIP、AQP3、AQP4的mRNA相对表达水平;16S rDNA测序分析其肠道菌群的变化。结果:与空白组比较,一般体征结果显示,模型组大鼠体质量和进食量均明显降低,饮水量明显增多(P0.05,P0.01),游泳持续时间显著减少(P0.01);病理检测结果显示,模型组大鼠胃组织黏膜出现排列不齐,结肠组织黏膜可见明显变薄或有残缺,上皮细胞出现坏死甚至脱落现象;与空白组比较,模型组大鼠尿D-木糖排泄率显著降低(P0.01),血清GAS含量明显降低(P0.05);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组大鼠胃组织中VIP蛋白的相对表达水平显著降低(P0.01),AQP4、AQP3蛋白的相对表达水平显著增加(P0.01);Real-time PCR结果显示,与空白组比较,模型组大鼠胃组织中VIP mRNA的相对表达水平显著降低(P0.01),AQP3和AQP4 mRNA的相对表达水平明显增加(P0.05,P0.01);肠道菌群分析结果显示,与空白组比较,模型组操作分类单元(OTU)数目和α多样性增加,β多样性明显降低,紫单胞菌科丰度明显增加,产丁酸菌种丰度明显降低(P0.05);斯皮尔曼计算法(Spearman)相关分析显示,紫单胞菌科与AQP4蛋白水平呈明显正相关(P0.05),产丁酸菌种与VIP蛋白水平呈明显正相关(P0.05),与AQP3、AQP4蛋白水平呈明显负相关(P0.05);线性判别分析(LDA)效应量(LEfSe)结果显示,组间多种肠道菌存在明显差异,模型组大鼠肠道中迷踪菌门/目/科/属、β-变形菌纲、伯克氏菌目、萨特菌科、副萨特氏菌属被明显富集(P0.05)。结论:脾阴虚证可以减弱胃肠道的消化和吸收能力,引起水液代谢和肠道菌群的紊乱,胃黏膜VIP、AQP3、AQP4蛋白水平与紫单胞菌科、产丁酸菌种密切相关,VIP、AQP3、AQP4可能参与调节肠道菌群以影响脾主运化的生理功能。