微小隐孢子虫热休克蛋白Hsp90的原核表达与鉴定

作     者：冯琪 张楠 宫鹏涛 王晓岑 李新 张旭 王鑫 张西臣 FENG Qi;ZHANG Nan;GONG Pengtao;WANG Xiaocen;LI Xin;ZHANG Xu;WANG Xin;ZHANG Xichen

作者机构：吉林大学动物医学学院人兽共患病研究教育部重点实验室吉林长春130062 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2023年第18卷第12期

页      面：1407-1410页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.31972704) 国家重点研发计划资助项目(No.2022YFD1800200) 

主　　题：微小隐孢子虫 热休克蛋白Hsp90 表达鉴定 蛋白纯化 

摘      要：目的对微小隐孢子虫热休克蛋白Hsp90蛋白进行原核表达与鉴定。方法根据微小隐孢子虫Hsp90基因的CDS区设计引物,PCR扩增长度为2136 bp的Hsp90基因片段,然后将其连接至pET-32a(-)载体,构建重组质粒PET-32a-Hsp90。将重组质粒转化入BL21感受态,使用0.1 mmol/L IPTG诱导重组Hsp90蛋白的表达并进行SDSPAGE分析;采用His标签蛋白填料纯化柱对表达产物进行纯化,采用Western blot鉴定重组蛋白Hsp90的反应原性。结果PCR扩增微小隐孢子虫Hsp90基因片段大小为2136 bp,测序表明扩增基因片段大小正确并成功与PET-32a(-)连接。将PET-32a-Hsp90转化入BL21感受态,经IPTG诱导表达分子质量约为78.32 ku的重组Hsp90蛋白,Western blot检测该蛋白能被Anti-His标签抗体识别。结论成功构建PET-32a-Hsp90重组质粒,并通过原核表达系统成功表达具有反应原性的重组Hsp90蛋白,为该蛋白的功能研究奠定了基础。