巴西橡胶HMG-CoA还原酶的分离纯化

作     者：黄俊生 孔德謇 邓晓江 蔡世英 

作者机构：热带作物生物技术国家重点实验室海南儋县571737 华南热带作物学院热带作物学系海南儋县571737 

出 版 物：《热带作物学报》 (Chinese Journal of Tropical Crops)

年 卷 期：1992年第13卷第2期

页      面：1-8页

核心收录：

学科分类：0907[农学-林学] 08[工学] 0829[工学-林业工程] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金 

主　　题：橡胶树 乳浊液 HMG-CoA 还原酶 

摘      要：以巴西橡胶树高产无性系热研7-33-97的新鲜胶乳为材料,分离纯化HMG-CoA还原酶的实验结果表明,低温下收集胶乳,在49000g,15℃下离心60min,离心胶乳底层部分经2％BrijW-1表面活性剂处理,可将其中结合在黄色体膜上的HMG-CoA还原酶洗脱下来,经40％(NH_4)_2SO_4盐析、Blue-dextron-agarose亲和层析、Mono Q(Pharmacia)离子交换层析,可达到HMG-CoA还原酶的纯化。用C_(?) Ultrapore TM反相柱(Beckman高效液相色谱)鉴定其纯度,用DU-70酶动力学分析系统(Beckman)检测底物NADPH在340nm处的消减,测定其HMG-CoA还原酶的活性。酶促反应动力学曲线的分析结果,前20min酶的反应初速度呈线性关系;以吸收光谱曲线分析发现,HMG-CoA还原酶在280nm处有最大吸收峰;用SDS-page测定酶亚基分子量为42K道尔顿;用IEF测定该酶的等电点为pH5.8。