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新型还原酶的挖掘与设计及手性醇的制备

高校化学工程学报 2022年第5期36卷 715-723页

作者：王能强吴思琪王新凤黎小军徐樱翠高健湖南科技大学生命科学与健康学院经济作物遗传改良与综合利用湖南省重点实验室湖南湘潭411201 新余学院基础医学教研室江西新余338004

为了解决生物催化制备手性化合物用催化剂需求的不足、还原酶催化过程存在酶活性低和底物浓度限制的问题。基于基因挖掘技术和还原酶保守序列分析,经筛选和设计获得了新型还原酶SDR05;采用单因素实验和Box-Behnken法,构建了表达还原酶SD... 详细信息

为了解决生物催化制备手性化合物用催化剂需求的不足、还原酶催化过程存在酶活性低和底物浓度限制的问题。基于基因挖掘技术和还原酶保守序列分析,经筛选和设计获得了新型还原酶SDR05;采用单因素实验和Box-Behnken法,构建了表达还原酶SDR05的重组菌不对称还原[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙酮(BTAP)制备相应手性醇的反应体系。结果表明,重组菌在以体积分数为69%异丙醇、3.9 mmol·L^(-1)氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))、1 mmol·L^(-1)MgCl_(2)、300 g·L^(-1)重组菌、3000 mmol·L^(-1) BTAP和pH为7.4磷酸缓冲液组成的反应体系和32℃、150 r·min^(-1)条件下催化反应18 h,产物产率和对映体过量值分别为98.3%和99.9%。研究结果丰富了还原酶库,实现BTAP底物在高质量浓度下的转化,为工业化制备(R)-1-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇等手性化合物奠定基础。

关键词：不对称生物催化还原酶基因挖掘与设计优化 (R)-1-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇

早发冠心病患者甲烯四氢叶酸还原酶基因的C677T多态性研究

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中国医学科学院学报 1999年第2期21卷 118-121页

作者：许海燕陈在嘉汤健朱大明张晨晖杨跃进陈纪林中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院冠心病研究室北京医科大学心血管基础研究所

目的探讨同型半胱氨酸代谢过程的关键酶之一——甲烯四氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）基因Ｃ６７７Ｔ多态性与早发冠心病发病的关系。方法采用限制性内切酶片段长度多态性方法检测患者的ＭＴＨＦＲ基因Ｃ６７７Ｔ位碱基突变。结果６７例患... 详细信息

目的探讨同型半胱氨酸代谢过程的关键酶之一——甲烯四氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）基因Ｃ６７７Ｔ多态性与早发冠心病发病的关系。方法采用限制性内切酶片段长度多态性方法检测患者的ＭＴＨＦＲ基因Ｃ６７７Ｔ位碱基突变。结果６７例患者中Ｔ纯合基因型占３４．３％（２３／６７）、杂合基因型占４３．３％（２９／６７），Ｃ纯合基因型占２２．４％（１５／６７）；Ｔ等位基因频率为５５．９％（７５／１３４），Ｃ等位基因频率为４４．１％（５９／１３４）；与正常对照组比较，差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０５）。结论ＭＴＨＦＲ基因Ｃ６７７Ｔ点突变可能是中国人早发冠心病发病的危险因素之一。

关键词：冠心病甲烯四氢叶酸还原酶

中国人遗传性高铁血红蛋白血症NADH-细胞色素b5还原酶基因L72P突变

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中华血液学杂志 1998年第4期19卷 195-197页

作者：吴玉水黄长晖朱忠勇王瑶唐玉钗郑培蒸南京军区福州总医院医学检验中心第二军医大学分子遗传学开放实验室

目的：鉴定导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ）的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）基因突变类型，探讨ＲＣＭ发病的分子基础。方法：逆转录－聚合酶链反应产物直接测序和ｃＤＮＡ克隆测序分析先证者的ｂ５Ｒ编码基因；... 详细信息

目的：鉴定导致中国人遗传性高铁血红蛋白血症（ＲＣＭ）的ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）基因突变类型，探讨ＲＣＭ发病的分子基础。方法：逆转录－聚合酶链反应产物直接测序和ｃＤＮＡ克隆测序分析先证者的ｂ５Ｒ编码基因；限制性酶切分析其基因组ＤＮＡ。结果：发现一例ＲＣＭ患者ｂ５Ｒ基因第７２密码子存在新的错义突变（ＣＴＣ→ＣＣＣ）。结论：该突变导致ｂ５Ｒ蛋白第７２位亮氨酸被脯氨酸替换（Ｌ７２Ｐ）是该先证者致病的分子基础；进一步证实Ⅰ型ＲＣＭ患者的ｂ５Ｒ基因突变多发生在近５′端部分。

关键词： RCM 血红蛋白血症细胞色素b5 还原酶基因突变

HHV－6核糖核苷酸还原酶基因克隆表达和功能研究

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中华微生物学和免疫学杂志 1996年第5期16卷 370-373页

作者：钱利生山西弘一上海医科大学微生物学教研组日本大阪大学微生物病研究所

本文报道应用分子生物学技术，对人疱疹病毒－６型（ＨＨＶ－６）核糖核苷酸还原酶（ＲｉＲ）基因克隆表达和功能的研究。选用已作全序列测定的ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段，用核酸蛋白分析软件作分析，发现含有ＲｉＲＯＲＦ（开读框架），... 详细信息

本文报道应用分子生物学技术，对人疱疹病毒－６型（ＨＨＶ－６）核糖核苷酸还原酶（ＲｉＲ）基因克隆表达和功能的研究。选用已作全序列测定的ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段，用核酸蛋白分析软件作分析，发现含有ＲｉＲＯＲＦ（开读框架），全长为２４１４个核苷酸，与ＨＣＭＶ（人巨细胞病毒）相关，最适记分达４５９。应用ＰＣＲ（多聚酶链反应）和分子克隆技术，获得重组质粒ｐＳＴｒｃ２８，引入ＲｉＲ缺损突变菌株ＪＥ７５１１，成功地表达ＲｉＲ蛋白。在标准测定系统，该蛋白催化ＮＡＤＰＨ氧化能力类似大肠杆菌ＪＭ１０９株ＲｉＲ。证实ＨＨＶ－６ＲｉＲＯＲＦ编码的蛋白质，具有ＲｉＲ功能，由此可从ＲｉＲ的核酸和蛋白质水平，为研究ＨＨＶ－６的致病和防治提供新途径。

关键词：人疱疹病毒 6型核糖核苷酸还原酶基因表达

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还原六价铬细菌及其还原酶的研究

中国生物工程杂志 2012年第4期32卷 53-59页

作者：魏斐杨丽荣薛保国吴坤河南省农科院植物保护研究所河南省农作物病虫害防治重点试验室郑州450002 河南农业大学生命科学学院郑州450002

从活性污泥中筛选出的C-2苏云金芽孢杆菌,能耐受250mg/L的六价铬,并具有较好的还原能力。研究表明木糖、果糖、玉米饼粉、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸及Cu2+、Fe2+、Ca2+离子对C-2菌的还原有积极作用,菌体的接种量影响还原的速率。C-2菌还... 详细信息

从活性污泥中筛选出的C-2苏云金芽孢杆菌,能耐受250mg/L的六价铬,并具有较好的还原能力。研究表明木糖、果糖、玉米饼粉、苹果酸、琥珀酸、柠檬酸及Cu2+、Fe2+、Ca2+离子对C-2菌的还原有积极作用,菌体的接种量影响还原的速率。C-2菌还原的最适温度为37℃,最适pH为9.0;六价铬还原酶的最适pH为7.0、温度为37℃,Co2+、Cu2+、Fe2+、DTT、NADH对酶的还原有积极影响。

关键词： C-2菌六价铬还原酶

过氧化物还原酶6 干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化

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中国组织工程研究 2021年第7期25卷 1014-1018页

作者：伦志刚金晶王添艳李爱民徐州医科大学附属连云港医院江苏省连云港市222002

背景:目前已发现许多物质能够体外促进骨髓间充质干细胞向神经谱系分化,过氧化物还原酶6对骨髓间充质干细胞的影响尚未见相关研究。目的:探索过氧化物还原酶6对大鼠骨髓间充质干细胞增殖以及体外向神经谱系诱导分化的影响。方法:体外通... 详细信息

背景:目前已发现许多物质能够体外促进骨髓间充质干细胞向神经谱系分化,过氧化物还原酶6对骨髓间充质干细胞的影响尚未见相关研究。目的:探索过氧化物还原酶6对大鼠骨髓间充质干细胞增殖以及体外向神经谱系诱导分化的影响。方法:体外通过全骨髓贴壁培养法获得SD大鼠骨髓间充质干细胞,传到第3代分为5组:PBS溶媒组、1,10,100μg/L和1 mg/L过氧化物还原酶6组,CCK-8法检测各组细胞450 nm处的吸光度值,连续测9 d绘制细胞生长曲线;结合生长曲线,酶联免疫检测仪重复测定平台期波长为450 nm的吸光度值。然后选择相对最适质量浓度过氧化物还原酶6诱导骨髓间充质干细胞向神经谱系分化,以PBS为对照组,诱导分化7 d采用免疫荧光染色和Western blot检测神经元标记蛋白NSE、胶质细胞标记蛋白GFAP的表达。结果与结论:①1,10,100μg/L过氧化物还原酶6组符合骨髓间充质干细胞一般生长规律,10μg/L为最适质量浓度;②过氧化物还原酶6诱导后可见NSE、GFAP免疫荧光染色阳性,NSE、GFAP蛋白表达高于对照组;③体外实验结果表明,适量质量浓度的过氧化物还原酶6具有促进骨髓间充质干细胞增殖以及向神经谱系诱导分化的作用。

关键词：干细胞骨髓间充质干细胞还原酶神经神经谱系因子大鼠实验

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5α-还原酶的分子生物学研究

国外医学（计划生育分册） 1994年第2期13卷 101-103页

作者：崔毓桂国家计划生育委员会科学技术研究所

5α-还原酶催化睾酮转化为活性更强的双氢睾酮。现已证实,5α-还原酶是二个酶的同功酶(5α-R-1和5α-R-2),分别由2个不同的基因编码,并且已经克隆成功了二个酶的cDNA。二个酶的蛋白质氨基酸顺序仅50％相同,酶活性的最适pH分别是6～8和5... 详细信息

5α-还原酶催化睾酮转化为活性更强的双氢睾酮。现已证实,5α-还原酶是二个酶的同功酶(5α-R-1和5α-R-2),分别由2个不同的基因编码,并且已经克隆成功了二个酶的cDNA。二个酶的蛋白质氨基酸顺序仅50％相同,酶活性的最适pH分别是6～8和5.5,并且对底物(睾酮、NADPH)的亲和力和组织分布差异性很大,在类固醇代谢过程中的作用也不同。5α-还原酶缺乏症,是由于基因组中2型酶基因缺陷,导致2型5α-还原酶的缺乏,而1型酶的结构、含量和活性及其基因的结构是正常的。

关键词：还原酶 5α-还原酶分子生物学

非双层脂对辅酶Q-细胞色素c还原酶呼吸控制率的影响

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生物物理学报 1993年第1期9卷 46-50页

作者：郑连兴李路徐建兴杨福愉生物大分子国家重点实验室中国科学院生物物理所北京100101

分离提纯的辅酶Q细胞色素c还原酶经胆酸盐透析法重组于各种脂质体上,发现脂质体中PE含量的升高可显著提高辅酶Q-细胞色素c还原酶的呼吸控制率.在PE含量为60%-80%时达到最高值,DOPE的L_x—H_Ⅱ的相变温度显著低于DEPE,脂酶体中DOPE含量... 详细信息

分离提纯的辅酶Q细胞色素c还原酶经胆酸盐透析法重组于各种脂质体上,发现脂质体中PE含量的升高可显著提高辅酶Q-细胞色素c还原酶的呼吸控制率.在PE含量为60%-80%时达到最高值,DOPE的L_x—H_Ⅱ的相变温度显著低于DEPE,脂酶体中DOPE含量的提高,可显著提高酶的呼吸控制率,而DEPE的影响很小,改变脂酶体中心磷脂的含量对呼吸控制率的影响较小.含有PE脂酶体中酶的CD谱419nm处的正峰,随PE含量的增大而增强,表明酶蛋白中血红素辅基的微环境有所改变.NBD-DOPE标记脂酶体研究了不同脂酶体的 L_x-H_Ⅱ的相变性质,表明PE含量的降低脂质体的相变温度上升甚至消失.

关键词：非双层酯辅酶细胞色素还原酶

先天性高铁血红蛋白血症──细胞色素b_5还原酶缺乏症的分子发病机理

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中华医学遗传学杂志 1996年第4期13卷 237-239页

作者：凌光鑫程爽广东医学院

先天性高铁血红蛋白血症──细胞色素ｂ_５还原酶缺乏症的分子发病机理凌光鑫，程爽１红细胞内的还原系统红细胞的酶和非酶系统能使氧化生成的高铁血红蛋白（ＭＨｂ）还原。主要通过ＮＡＤＨ－ＭＨｂ还原酶，又称黄递酶，现证实为细胞... 详细信息

先天性高铁血红蛋白血症──细胞色素ｂ_５还原酶缺乏症的分子发病机理凌光鑫，程爽１红细胞内的还原系统红细胞的酶和非酶系统能使氧化生成的高铁血红蛋白（ＭＨｂ）还原。主要通过ＮＡＤＨ－ＭＨｂ还原酶，又称黄递酶，现证实为细胞色素ｂ５还原酶（ＮＡＤＨ－ｃｙｔｏ?..

关键词：先天性高铁血红蛋白症细胞色素还原酶缺乏症