新型分枝杆菌荧光报告噬菌体的构建及其在结核分枝杆菌药敏检测中的应用

作     者：钱程成 马瑞青 郭明权 范小勇 Qian Chengcheng;Ma Ruiqing;Guo Mingquan;Fan Xiaoyong

作者机构：温州医科大学检验医学院、生命科学学院温州325035 上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心科学研究部上海201508 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2023年第43卷第10期

页      面：749-755页

核心收录：

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发项目(2022YFC2302900) 上海市卫健委项目(20214Y0089,2022XD060) 国家自然科学基金(82171815) 上海市科委项目(20Y11903400) 

主　　题：结核分枝杆菌 荧光报告噬菌体 药物敏感性测试 耐药结核 

摘      要：目的设计基于纳米荧光素酶(Nluc)的新型荧光报告系统,构建新型分枝杆菌荧光报告噬菌体ΦFN,分析该噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性的能力。方法构建P_(furAma)启动子控制表达的Nluc荧光报告系统,将其整合至耻垢分枝杆菌基因组中,测试其在分枝杆菌的荧光报告能力;随后将P_(furAma)-nluc报告系统整合到TM4分枝杆菌噬菌体基因组中,构建新型分枝杆菌荧光报告噬菌体ΦFN;通过调整药物预处理时间、感染时间等条件,建立ΦFN检测分枝杆菌耐药性的快速检测流程,在96孔板中检测52株已知耐药性的结核分枝杆菌临床分离株对3种一线抗结核药物耐药的耐药性。结果整合型表达荧光报告系统P_(furAma)-nluc的耻垢分枝杆菌可报告下限达到100菌落形成单位(colony-forming unit,CFU),低于已报道的P_(left)启动子表达nluc系统。新型分枝杆菌荧光报告噬菌体ΦFN可通过孔板读值法在24 h内检测到分枝杆菌的存在,检测下限达到100 CFU。药物与待测菌预培养48 h后再加入噬菌体孵育24 h,敏感菌在105 CFU以下均无法检测到荧光信号,可有效区分敏感株并进行耐药性的快速检测。以罗氏药敏实验作为金标准,使用ΦFN检测52株结核分枝杆菌临床菌株对利福平、异烟肼和链霉素的耐药性,检测准确性分别是51/52、48/52、49/52。结论利用新型重组荧光报告噬菌体检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼、链霉素的耐药性具有极高的准确性,报告时间仅需3 d,有望成为一种快速简便的结核分枝杆菌耐药性检测新方法。