新型鹅细小病毒VP2蛋白的原核可溶性表达及优化

作     者：向凤君 刘琳敏 雷白时 杨颖 郭笑然 路文斌 田甜 张武超 赵款 袁万哲 XIANG Feng-jun;LIU Lin-min;LEI Bai-shi;YANG Ying;GUO Xiao-ran;LU Wen-bin;TIAN Tian;ZHANG Wu-chao;ZHAO Kuan;YUAN Wan-zhe

作者机构：河北农业大学动物医学院 河北省兽医生物技术创新中心 农业农村部动物疫病病原生物学华北科学观测实验站 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第10期

页      面：1285-1291页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：河北省自然基金面上项目(C2021204028) 河北农业大学科研发展基金计划项目(JY2022026) 

主　　题：新型鹅细小病毒 分子伴侣 可溶性表达 原核表达 

摘      要：本研究利用基因工程技术将VP2编码基因克隆至载体pET-32a(+)中,成功构建重组质粒pET-32a-VP2,通过表达条件摸索发现VP2为包涵体表达。为了实现VP2蛋白的可溶性表达,制备含有能表达分子伴侣蛋白groES-groEL-tig的质粒pG-Tf2和重组质粒pET-32a-VP2双质粒表达系统。通过对双质粒表达系统表达条件的探索,发现在IPTG为0.25 mmol/L、四环素碱为250μg/L、诱导时间12 h、诱导温度20℃时可溶性表达效果最佳,可溶性蛋白占总表达量80%。经过Western-blot分析,证实重组蛋白具有良好反应原性。结果表明,利用分子伴侣与NGPV VP2蛋白的共表达系统,实现了新型鹅细小病毒(NGPV)VP2在大肠杆菌中的可溶性表达,为检测方法的建立和亚单位疫苗的研发奠定基础。