猪流行性腹泻病毒nsp8蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作     者：朱婷 洪润婧 徐雅雯 范红结 蔺辉星 ZHU Ting;HONG Run-jing;XU Ya-wen;FAN Hong-jie;LIN Hui-xing

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第10期

页      面：1279-1284页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2022YFD1800900) 国家自然科学基金项目(31702278) 大学生创新训练计划(SRT)项目(202217YX777,202317XX47) 江苏高校优势学科建设工程专项资金项目(PAPD) 

主　　题：猪流行性腹泻病毒 非结构蛋白8 多克隆抗体 复制/转录复合物 

摘      要：复制/转录复合物(RTC)在冠状病毒复制过程中具有重要作用。猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白8(nsp8)参与病毒RTC的形成。因此,可将nsp8作为RTC的检测标志之一。为获得PEDV nsp8蛋白并制备其多克隆抗体,本研究通过同源重组的方法将PEDV nsp8基因与质粒pET-28a(+)连接。将重组质粒pET-28a-nsp8转化至大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达。用镍柱纯化6His-nsp8蛋白并对其进行复性,然后用凝血酶酶切去除his标签,得到纯化的nsp8蛋白。SDS-PAGE结果显示,重组nsp8蛋白大小为27 ku。以纯化的nsp8蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。Western-blot结果表明,本研究制备的家兔抗nsp8多克隆抗体可与nsp8蛋白反应。用该多克隆抗体进行间接免疫荧光(IFA)试验,可在PEDV感染细胞的细胞核周围观察到明显的荧光,表明nsp8多克隆抗体可用于病毒RTC的检测。上述研究结果为冠状病毒RTC的形成机制及其功能研究奠定了基础。