桉蝙蛾幼虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选

作     者：陈晓 邱峙嵩 苏小燕 许原 曹丽沙 杨振德 胡平 CHEN Xiao;QIU Zhi-Song;SU Xiao-Yan;XU Yuan;CAO Li-Sha;YANG Zhen-De;HU Ping

作者机构：广西大学林学院南宁530004 

出 版 物：《环境昆虫学报》 (Journal of Environmental Entomology)

年 卷 期：2023年第45卷第4期

页      面：1016-1026页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0904[农学-植物保护] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：广西壮族自治区科技基地和人才专项(2020AC19057) 广西壮族自治区自然科学基金面上项目(2020JJA130068) 国家自然科学基金青年科学基金(32001321) 

主　　题：桉蝙蛾 幼虫 龄期 体节 内参基因 RT-qPCR 

摘      要：本研究通过筛选桉蝙蛾Endoclita signifer Walker幼虫不同龄期与不同体节中稳定表达的内参基因,为桉蝙蛾基因表达研究提供参考。通过实时荧光定量PCR技术测定5个候选内参基因(ACTIN、GAPDH、TUB、RIB、EF)在桉蝙蛾幼虫不同龄期(3龄、5龄、9龄、12龄)与不同体节(头部、胸部、腹部)及全样品(由所有样品组成)处理中的表达量,后利用GeNorm、NormFinder、BestKeeper对5个候选基因的稳定性进行评估,最后由RefFinder综合分析结果,选出最佳的内参基因。基于4种分析方法的评估可知,桉蝙蛾5龄和9龄幼虫的不同体节、不同龄期幼虫的头部和胸部中内参基因的最佳数目为2,而3龄和12龄幼虫的不同体节、不同龄期幼虫的腹部及全样本中内参基因的最佳数目为3。3龄、5龄、9龄和12龄幼虫的不同体节中可分别选择ACTIN+RIB+GAPDH、EF+RIB、GAPDH+EF和ACTIN+RIB+GAPDH作为最稳定的内参基因组合;EF+RIB、RIB+GAPDH和EF+GAPDH+ACTIN可分别作为不同龄期幼虫头部、胸部和腹部的最佳内参基因组合;综合考虑桉蝙蛾幼虫不同龄期与不同体节的影响时,可选择RIB、ACTIN和GAPDH作为内参基因。