兔出血症病毒1、2型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用

作     者：王冠萱 陈萌萌 仇汝龙 范志宇 胡波 宋艳华 魏后军 葛雷 徐为中 王芳 钱莺娟 Wang Guanxuan

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所/农业农村部兽用生物制品工程重点实验室江苏南京210014 南京农业大学动物医学院/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室/农业农村部动物细菌学重点实验室江苏南京210095 

出 版 物：《江苏农业科学》 (Jiangsu Agricultural Sciences)

年 卷 期：2023年第51卷第18期

页      面：40-44页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：现代农业产业技术体系建设专项(编号:CARS-43-C-1) 

主　　题：兔出血症病毒1型 兔出血症病毒2型 双重TaqMan qPCR 

摘      要：兔出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血症病毒1型(GI.1)和兔出血症病毒2型(GI.2)2种基因型均有在我国流行。为了更好地进行流行病学调查、实时监测兔出血症发展趋势和临床诊断,建立了一种检测RHDV1型和RHDV2型病原的快速、简单、特异且敏感的Taq Man实时PCR。结果显示,稀释度为1×10^(8)~1×10^(4) copies/μL标准品建立的标准曲线有良好的线性关系,决定系数r^(2)为0.999;该方法对RHDV1型和RHDV2型具有高度特异性,与兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌等其他病原没有任何交叉反应;检测灵敏度为100~1000 copies/μL;组内和组间变异系数在0.01%~1.61%之间。用该方法对60份临床肝脏样品和52份鼻肛拭子样本进行检测,结果显示,RHDV检出率为70.5%,敏感性显著高于普通RT-PCR方法(51%)。因此,该方法能够同时检测RHDV1型和RHDV2型,可用于鉴别诊断兔出血症病毒。